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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反向pcr老是p不出条带，或者只有很细的条带
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qiumin1018

新虫 (初入文坛)

[求助] 反向pcr老是p不出条带，或者只有很细的条带 已有2人参与

求助各位大佬们，我想在质粒上我的目标基因的后面紧跟着插入一个红色荧光mCherry基因，因此想通过反p的方式得到线性质粒，我的质粒大小大概是6000bP，pcr 有尝试过不同的退火温度，也尝试过减少循环数，跑出来的条带要么没有要么就只有很细的一点，且脱尾严重，求解决方案

@biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw @wizardfan 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2024-06-20 15:59:51
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以换不同的高保真酶PCR，比如Pfu酶， 模板适量，不要太浓
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2楼2024-06-27 09:59:49
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Andy_124

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2024-12-04 15:24:00
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strongFv

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

正向扩增的效果如何呢？如果正向很正常，反向效果不好，可能是有复杂结构阻碍了扩增。可以用耐脏性强一点的酶，比如达领的金牌，高保真的同时对模板宽容度比较高。
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4楼2024-12-10 16:58:21
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