应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反向pcr老是p不出条带，或者只有很细的条带
51/1返回列表
查看: 1588  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者qiumin1018将赠送您 35 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

qiumin1018

新虫 (初入文坛)

[求助] 反向pcr老是p不出条带，或者只有很细的条带 已有2人参与

求助各位大佬们，我想在质粒上我的目标基因的后面紧跟着插入一个红色荧光mCherry基因，因此想通过反p的方式得到线性质粒，我的质粒大小大概是6000bP，pcr 有尝试过不同的退火温度，也尝试过减少循环数，跑出来的条带要么没有要么就只有很细的一点，且脱尾严重，求解决方案

@biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw @wizardfan 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2024-06-20 15:59:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

strongFv

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

正向扩增的效果如何呢？如果正向很正常，反向效果不好，可能是有复杂结构阻碍了扩增。可以用耐脏性强一点的酶，比如达领的金牌，高保真的同时对模板宽容度比较高。
赞一下 回复此楼
4楼2024-12-10 16:58:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

Ivy尘

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以换不同的高保真酶PCR，比如Pfu酶， 模板适量，不要太浓
赞一下 回复此楼
2楼2024-06-27 09:59:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Andy_124

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2024-12-04 15:24:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290 材料与化工求调剂 +8 Nebulala 2026-03-08 8/400 2026-03-12 15:19 by wyb0328
[考研] 302求调剂 +4 负心者当诛 2026-03-11 4/200 2026-03-12 15:03 by 每天只摆一小会
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +5 mysdl 2026-03-11 7/350 2026-03-12 14:43 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +15 稻妻小编 2026-03-09 17/850 2026-03-11 22:45 by 2020015
[考研] 0703求调剂 +6 jtyq001 2026-03-10 6/300 2026-03-11 22:18 by peike
[考研] 083000环境科学与工程调剂 +8 mingmingry 2026-03-09 9/450 2026-03-11 10:23 by 沙漠之狐994
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +4 无懈可击的巨人 2026-03-10 4/200 2026-03-10 22:45 by 星空星月
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
[考研] 材料工程专硕调剂自荐信，初试323 +6 李白26 2026-03-07 6/300 2026-03-10 16:16 by 无际的草原
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
[考研] 0817一志愿苏州大学280复试调剂 +9 kk扛 2026-03-07 9/450 2026-03-10 14:20 by peike
[考研] 278求调剂 +8 Gale1314 2026-03-06 8/400 2026-03-10 14:18 by Linda Hu
[考研] 085701环境工程295求调剂，一志愿A区211 +8 等春来， 2026-03-06 9/450 2026-03-10 10:38 by 沙漠之狐994
[考研] 化工284求调剂 +12 小黑想变白 2026-03-07 12/600 2026-03-10 09:17 by Wahxp
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
[考研] 310 070300化学求调剂 +4 扑风铃的猫 2026-03-08 5/250 2026-03-09 19:46 by 30660438
[考研] 一志愿南大化学339分求调剂，四六级已过，有比赛，有文章 +7 Gallantzhou 2026-03-07 7/350 2026-03-09 18:38 by 30660438
[教师之家] 交大前校长王树国：现在最先进的科技并不在大学实验室，而是在企业研究院 +4 zju2000 2026-03-08 6/300 2026-03-08 19:15 by zju2000
[考研] 334求调剂 +8 Trying] 2026-03-06 8/400 2026-03-08 14:51 by hmn_wj
[考研] 085600，一志愿郑州大学，280分求调剂 +7 Wuqi725 2026-03-05 7/350 2026-03-06 08:12 by 杨杨杨紫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭