| 查看: 6227 | 回复: 3 | |||
[交流]
菌株荧光标记方法 已有2人参与
|
|
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)作为一种理想的活体荧光标记分子，越来越多地被用于活细胞或微生物的定位、结构和动力学的研究，也可以通过测定GFP的荧光强度对菌株中GFP的表达量进行定量分析[1]。GFP已经在许多细菌中完成了转化，如：（1）利用GFP追踪了乳酸乳球菌WH-C1在小鼠肠道内的定植情况；（2）利用GFP发现德氏乳杆菌D17嵌入在黏液层中，局部接近肠道的上皮细胞；（3）在植物乳杆菌WCFS1中进行GFP标记，研究WCFS1在肠道内的定植与分布。 红色荧光蛋白 (Red Fluorescent Protein, RFP)相比绿色荧光蛋白 (GFP)其灵敏度更高, 是基于GFP基础上的一种优良稳定的荧光蛋白。目前已在不同的菌株中成功进行RFP标记，如：（1）在根瘤菌中进行RFP荧光标记，可探究根瘤菌结瘤固氮能力及根瘤菌与土著菌竞争关系 [2]；（2）构建了以红色荧光蛋白基因 (dsred2) 为标记, 以α-淀粉酶 (amy) 为报告基因的表达载体, 成功实现了融合基因dsred2-amy在干酪乳杆菌中的融合表达；（3）铜绿假单胞菌中转入RFP标记，证实其在含油多孔物质中的迁移扩散及所受限制[3]；（4）在幽门26695中构建了GFP和RFP荧光标记，用于探究幽门的遗传调控和信号追踪[4]。 mCherry荧光蛋白也叫樱桃荧光蛋白，是从蘑菇珊瑚（mushroom coral）中分离出来的单体红色荧光蛋白，相较于其它单体荧光蛋白，其颜色和单体分子的光稳定性更强。mCherry荧光标记技术在细胞生物学、分子生物学和神经科学等多个领域都有广泛应用，用于追踪蛋白质、细胞器或其他生物大分子在活细胞中的分布和动态。近年来, mCherry用于荧光标记的研究报道逐渐增多, 相对其他荧光蛋白, 该荧光标记具有标记基因小、背景低等优点, 且与已报道的dsred2红色荧光基因相比, 其荧光强度及稳定性更好。目前已成功在多种菌株中进行标记：如：（1）成功在蒙氏肠球菌ST4SA和植物乳杆菌423中进行mCherry荧光蛋白标记；（2）在植物乳杆菌中进行mCherry荧光蛋白标记，是探究其在生物体内的定位、示踪及益生性作用机制的有效技术手段[5]。 实验流程： 1：构建荧光标记载体； 2：电转至受体菌； 3：涂布抗性筛选平板； 4：抗性筛选培养基扩大培养； 5：PCR验证质粒是否存在； 6：紫外验证荧光； 7：抗性筛选培养基扩大培养      发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有191人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
| 好 |
2楼2024-05-28 10:51:26
3楼2024-05-29 09:39:52
4楼2026-04-21 10:11:47
