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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by l_inhumain at 2009-10-19 22:53:
我觉得很多时候由于引物的设计受到模板的控制,腾挪余地并不大,有些tm值相差很大,与引物设计规则差异也会很大,但大多数情况还是能够P出条带来的,不用太担心。设计的引物与规则越相符只能说明P出来的条带会好看 ...

哦  呵呵  真是太感激了!
21楼2009-10-20 09:06:20
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-19 23:04:

对啊,不要有什么心理压力嘛,我觉得很简单,很正常的。

谢谢谢谢!
22楼2009-10-20 09:06:50
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-19 23:04:

对啊,不要有什么心理压力嘛,我觉得很简单,很正常的。

还有一个问题,
我的Tm值 引物报告合成单上的和自己用软件计算出来的不一样,有一个相差6  我该用哪个比较好呢?
23楼2009-10-20 09:09:03
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jinran

金虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还是做个梯度试试吧,每次相差2°C,哪个效果好就用哪个
24楼2009-10-21 09:50:03
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-19 17:08:
其实我觉得影响不大,每次我都不按照Tm值PCR都,一般都用55℃拉,一般都可以拉的出来,不行的话就降低一下退火温度。

我用降落PCR  79到63  每个循环降0.5  没有出来条带   

又做了梯度PCR,从56到61  还是没有条带-------
25楼2009-10-23 16:38:57
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xiangao

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 彩云朵朵 at 2009-10-20 09:09:

还有一个问题,
我的Tm值 引物报告合成单上的和自己用软件计算出来的不一样,有一个相差6  我该用哪个比较好呢?

以报告单为准,因为Tm计算方法不一样。软件好像只按原始公式Tm=4(G+T)+2(A+C)算的
26楼2009-10-23 22:32:48
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kitty8682

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
按低的减5度试,如果没p出来,在逐度提高p
27楼2009-10-24 08:30:56
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superyuanjia

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不知道有没有条件做梯度,我们一般做个梯度
28楼2009-10-25 10:00:05
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

昨天按原来的程序,降落PCR,从79到63,把延伸时间改为15分钟,循环改为35,酶换了mixture,出来了
明天再做一遍,检验一下
如果出来了,再向大家汇报哈
29楼2009-10-25 16:05:07
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shenqinvwu

加甜菜碱试试
30楼2009-10-26 08:34:32
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