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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jjlbest at 2009-10-19 10:34:
是按低的那个引物来进行,退火温度可以在TM值的上下5度浮动。

谢谢!要不我就这么先p一下试试!
11楼2009-10-19 10:36:40
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
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Originally posted by 彩云朵朵 at 2009-10-19 10:31:

分别是73  93----

Tm好高啊,都快变性温度了,用68试试看。
Thank-you,so-blue.
12楼2009-10-19 10:59:55
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-10-19 10:59:

Tm好高啊,都快变性温度了,用68试试看。

是做的重叠延伸PCR. 为啥是68,能说说理由吗?万分感谢!
13楼2009-10-19 11:17:15
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

比最低的低五度
海纳百川止于至善
14楼2009-10-19 12:04:34
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 1949stone at 2009-10-19 12:04:
比最低的低五度

额  汗   这个都没看出来  太不好意思了  谢谢哈
15楼2009-10-19 12:21:30
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
其实我觉得影响不大,每次我都不按照Tm值PCR都,一般都用55℃拉,一般都可以拉的出来,不行的话就降低一下退火温度。
16楼2009-10-19 17:08:32
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-19 17:08:
其实我觉得影响不大,每次我都不按照Tm值PCR都,一般都用55℃拉,一般都可以拉的出来,不行的话就降低一下退火温度。

啊?这么简单?我以前也做过普通的PCR,很麻烦哪!  

再说我的是一个73 一个93 , 55的话感觉很悬,我明天试试再向大家汇报吧
17楼2009-10-19 17:19:13
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tf1984

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我感觉很难P出来吧?
退火温度差太多基本出不来东西吧!做做看吧不行重新设计下引物 前后加点东西
18楼2009-10-19 18:47:57
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l_inhumain

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得很多时候由于引物的设计受到模板的控制,腾挪余地并不大,有些tm值相差很大,与引物设计规则差异也会很大,但大多数情况还是能够P出条带来的,不用太担心。设计的引物与规则越相符只能说明P出来的条带会好看一些,概率会大一些,但绝对不是有和无的差异。
19楼2009-10-19 22:53:17
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 彩云朵朵 at 2009-10-19 17:19:


啊?这么简单?我以前也做过普通的PCR,很麻烦哪!  

再说我的是一个73 一个93 , 55的话感觉很悬,我明天试试再向大家汇报吧

对啊,不要有什么心理压力嘛,我觉得很简单,很正常的。
20楼2009-10-19 23:04:02
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