PCR反应两条引物Tm值相差很多怎么办？ - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2009-10-19 10:36:40

susizheng

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Originally posted by 彩云朵朵 at 2009-10-19 10:31:

分别是73 93----

Tm好高啊，都快变性温度了，用68试试看。

Thank-you，so-blue.

12楼2009-10-19 10:59:55

彩云朵朵

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Originally posted by susizheng at 2009-10-19 10:59:

Tm好高啊，都快变性温度了，用68试试看。

是做的重叠延伸PCR. 为啥是68,能说说理由吗？万分感谢！

13楼2009-10-19 11:17:15

1949stone

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比最低的低五度

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14楼2009-10-19 12:04:34

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Originally posted by 1949stone at 2009-10-19 12:04:
比最低的低五度

额汗这个都没看出来太不好意思了谢谢哈

15楼2009-10-19 12:21:30

zhuifeng7000

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其实我觉得影响不大，每次我都不按照Tm值PCR都，一般都用55℃拉，一般都可以拉的出来，不行的话就降低一下退火温度。

16楼2009-10-19 17:08:32

彩云朵朵

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Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-19 17:08:
其实我觉得影响不大，每次我都不按照Tm值PCR都，一般都用55℃拉，一般都可以拉的出来，不行的话就降低一下退火温度。

啊？这么简单？我以前也做过普通的PCR，很麻烦哪！

再说我的是一个73 一个93 ， 55的话感觉很悬，我明天试试再向大家汇报吧

17楼2009-10-19 17:19:13

tf1984

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我感觉很难P出来吧？
退火温度差太多基本出不来东西吧!做做看吧不行重新设计下引物前后加点东西

18楼2009-10-19 18:47:57

l_inhumain

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我觉得很多时候由于引物的设计受到模板的控制，腾挪余地并不大，有些tm值相差很大，与引物设计规则差异也会很大，但大多数情况还是能够P出条带来的，不用太担心。设计的引物与规则越相符只能说明P出来的条带会好看一些，概率会大一些，但绝对不是有和无的差异。

19楼2009-10-19 22:53:17

zhuifeng7000

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Originally posted by 彩云朵朵 at 2009-10-19 17:19:

啊？这么简单？我以前也做过普通的PCR，很麻烦哪！

再说我的是一个73 一个93 ， 55的话感觉很悬，我明天试试再向大家汇报吧

对啊，不要有什么心理压力嘛，我觉得很简单，很正常的。

20楼2009-10-19 23:04:02