[交流] PCR反应两条引物Tm值相差很多怎么办？

Originally posted by zhaocy8903 at 2009-10-19 09:31:
按低的算

Originally posted by hihoney at 2009-10-19 10:18:
P一下试试，不能P出来就重新设计了。

Originally posted by bioxixi at 2009-10-19 10:29:
你的引物就这样了 有什么办法了
你最好说出各是多少度 很多是多少啊
从低的开始了，要是很低就+2度，要是不是很低就先-5，然后每次+2递增，试试看

Originally posted by zrb7858 at 2009-10-19 10:25:
可以降落PCR扩

Originally posted by jjlbest at 2009-10-19 10:34:
是按低的那个引物来进行，退火温度可以在TM值的上下5度浮动。

Originally posted by susizheng at 2009-10-19 10:59:

Tm好高啊，都快变性温度了，用68试试看。

Originally posted by 1949stone at 2009-10-19 12:04:
比最低的低五度

Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-19 17:08:
其实我觉得影响不大，每次我都不按照Tm值PCR都，一般都用55℃拉，一般都可以拉的出来，不行的话就降低一下退火温度。

Originally posted by l_inhumain at 2009-10-19 22:53:
我觉得很多时候由于引物的设计受到模板的控制，腾挪余地并不大，有些tm值相差很大，与引物设计规则差异也会很大，但大多数情况还是能够P出条带来的，不用太担心。设计的引物与规则越相符只能说明P出来的条带会好看 ...