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yanzi3996

金虫 (小有名气)

[交流] 【讨论】蛋白质标准曲线

我用紫外分光光度计做牛血清蛋白BSA的标准曲线时,用的参比液是配置溶液的缓冲溶液,比色皿是1cm的石英比色皿,但是做出来的标准曲线不过原点,一对比色皿都用参比液,发现一个比色皿的吸光度为0,另一个的为0.021,这是为什么,应该都是0才对的,是不是这个原因得到的标准曲线不过原点,虫友们指点一下!
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思想决定一切的行动
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ziwoxiang

银虫 (正式写手)


yanzi3996(金币+1,VIP+0): 10-17 07:56
实验误差吧,不太懂
2楼2009-10-16 19:18:15
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rava

金虫 (小有名气)

★ ★
zeng1986kai(金币+2,VIP+0):谢谢应助! 10-16 21:22
用的是Bradford方法?比色皿没有清洗干净,在铬酸溶液里浸泡清洗后再用,如果上面有残留蛋白的话,当然会影响测定,结合考马斯亮蓝后会在595nm处产生吸收,这样标准曲线不过原点。
3楼2009-10-16 21:02:14
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王健

木虫 (小有名气)

标曲一定要过原点吗?
4楼2009-10-16 21:42:13
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yanzi3996

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 王健 at 2009-10-16 21:42:
标曲一定要过原点吗?

这也是我要问的,
思想决定一切的行动
5楼2009-10-17 07:55:45
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yanzi3996

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by rava at 2009-10-16 21:02:
用的是Bradford方法?比色皿没有清洗干净,在铬酸溶液里浸泡清洗后再用,如果上面有残留蛋白的话,当然会影响测定,结合考马斯亮蓝后会在595nm处产生吸收,这样标准曲线不过原点。

我用的是磷酸盐缓冲溶液溶解蛋白质的,在280m处测的,标准曲线不过原点也是对的吗
思想决定一切的行动
6楼2009-10-17 07:58:22
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rava

金虫 (小有名气)

★ ★
zeng1986kai(金币+2,VIP+0):谢谢应助! 10-17 10:13
图实验方便、保持参比池不动,根据不过原点的标准曲线的确照样可以得到样品的浓度(真的如此吗?)。但问题是,两个比色池为什么吸收不一样?你怎么知道两个比色池哪个干净、哪个不干净抑或都是脏的呢?那么你得到的样品浓度有意义吗?所以在做测试时最好不要耍小聪明,在两个比色池(原本是一对)出现吸收不同时肯定是不可以用来做浓度测定的,否则只有你自己会迷信数据的真实性。换言之,宁可相信不过原点的标准曲线是不能信赖的----因为你使用了存在污染的器皿!这是不允许的实验陋习,其实是思想上的问题。
7楼2009-10-17 08:16:00
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hihu

金虫 (小有名气)

实验仪器有时候也会出现误差
8楼2009-10-17 16:27:29
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dx109

铁杆木虫 (著名写手)


yanzi3996(金币+1,VIP+0):明白,我也这么想的 10-18 21:44
不是比色皿干净不干净的问题,原配的一对比色皿都会存在楼主说的现象,一般叫做"杯差";没有说标准曲线一定要过原点啊,即使你用溶剂调零或者做参比,得出的标准曲线都或多或少的有一点截距的!
9楼2009-10-17 22:44:22
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rava

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dx109 at 2009-10-17 22:44:
不是比色皿干净不干净的问题,原配的一对比色皿都会存在楼主说的现象,一般叫做"杯差";没有说标准曲线一定要过原点啊,即使你用溶剂调零或者做参比,得出的标准曲线都或多或少的有一点截距的!

如果有人使用过“杯差”超过0.02的对池,那我会非常佩服他居然肯花冤枉钱买这种石英材料。0.02是什么概念?仪器误差?返厂修理吧--或者有些老古董我不认得。即使不是对池也难以想象吸收会差到0.02。
只有你测定的BSA蛋白浓度较高时得到的标准曲线是不过原点的,此时原点和第一个线性数据点之间的值也是无效的。一般也不会采用很高的吸收值来进行浓度测定,误差增大。
10楼2009-10-17 23:44:31
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