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yanzi3996

金虫 (小有名气)

[交流] 【讨论】蛋白质标准曲线

我用紫外分光光度计做牛血清蛋白BSA的标准曲线时,用的参比液是配置溶液的缓冲溶液,比色皿是1cm的石英比色皿,但是做出来的标准曲线不过原点,一对比色皿都用参比液,发现一个比色皿的吸光度为0,另一个的为0.021,这是为什么,应该都是0才对的,是不是这个原因得到的标准曲线不过原点,虫友们指点一下!
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思想决定一切的行动
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rava

金虫 (小有名气)

★ ★
zeng1986kai(金币+2,VIP+0):谢谢应助! 10-17 10:13
图实验方便、保持参比池不动,根据不过原点的标准曲线的确照样可以得到样品的浓度(真的如此吗?)。但问题是,两个比色池为什么吸收不一样?你怎么知道两个比色池哪个干净、哪个不干净抑或都是脏的呢?那么你得到的样品浓度有意义吗?所以在做测试时最好不要耍小聪明,在两个比色池(原本是一对)出现吸收不同时肯定是不可以用来做浓度测定的,否则只有你自己会迷信数据的真实性。换言之,宁可相信不过原点的标准曲线是不能信赖的----因为你使用了存在污染的器皿!这是不允许的实验陋习,其实是思想上的问题。
7楼2009-10-17 08:16:00
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ziwoxiang

银虫 (正式写手)


yanzi3996(金币+1,VIP+0): 10-17 07:56
实验误差吧,不太懂
2楼2009-10-16 19:18:15
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rava

金虫 (小有名气)

★ ★
zeng1986kai(金币+2,VIP+0):谢谢应助! 10-16 21:22
用的是Bradford方法?比色皿没有清洗干净,在铬酸溶液里浸泡清洗后再用,如果上面有残留蛋白的话,当然会影响测定,结合考马斯亮蓝后会在595nm处产生吸收,这样标准曲线不过原点。
3楼2009-10-16 21:02:14
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王健

木虫 (小有名气)

标曲一定要过原点吗?
4楼2009-10-16 21:42:13
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