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yanzi3996

金虫 (小有名气)

[交流] 【讨论】蛋白质标准曲线

我用紫外分光光度计做牛血清蛋白BSA的标准曲线时,用的参比液是配置溶液的缓冲溶液,比色皿是1cm的石英比色皿,但是做出来的标准曲线不过原点,一对比色皿都用参比液,发现一个比色皿的吸光度为0,另一个的为0.021,这是为什么,应该都是0才对的,是不是这个原因得到的标准曲线不过原点,虫友们指点一下!
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rava

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dx109 at 2009-10-17 22:44:
不是比色皿干净不干净的问题,原配的一对比色皿都会存在楼主说的现象,一般叫做"杯差";没有说标准曲线一定要过原点啊,即使你用溶剂调零或者做参比,得出的标准曲线都或多或少的有一点截距的!

如果有人使用过“杯差”超过0.02的对池,那我会非常佩服他居然肯花冤枉钱买这种石英材料。0.02是什么概念?仪器误差?返厂修理吧--或者有些老古董我不认得。即使不是对池也难以想象吸收会差到0.02。
只有你测定的BSA蛋白浓度较高时得到的标准曲线是不过原点的,此时原点和第一个线性数据点之间的值也是无效的。一般也不会采用很高的吸收值来进行浓度测定,误差增大。
10楼2009-10-17 23:44:31
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ziwoxiang

银虫 (正式写手)


yanzi3996(金币+1,VIP+0): 10-17 07:56
实验误差吧,不太懂
2楼2009-10-16 19:18:15
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rava

金虫 (小有名气)

★ ★
zeng1986kai(金币+2,VIP+0):谢谢应助! 10-16 21:22
用的是Bradford方法?比色皿没有清洗干净,在铬酸溶液里浸泡清洗后再用,如果上面有残留蛋白的话,当然会影响测定,结合考马斯亮蓝后会在595nm处产生吸收,这样标准曲线不过原点。
3楼2009-10-16 21:02:14
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王健

木虫 (小有名气)

标曲一定要过原点吗?
4楼2009-10-16 21:42:13
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