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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » qPCR为什么数据总是有问题，求助求助！！！
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hsjzhhh

新虫 (初入文坛)

[求助] qPCR为什么数据总是有问题，求助求助！！！ 已有1人参与

我提取的粪便总DNA然后做qPCR比较目标菌的丰度，我通用引物选择的338F和518R，特异性引物是师姐之前做过的序列相同，但是！！每次特异性引物都扩不出来，峰很小，ct在39左右，通用引物熔解曲线倒是正常，不过ct值在9左右，而且数据都很匀，这到底是怎么回事呀，我应该怎么调整才能做出来呀！！！！
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1楼 2023-10-18 13:52:30
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momo莫模

新虫 (小有名气)
峰低应该是因为通用的那个太高了，纵坐标是扩增效率吧？我以前用不同种类的探针就会有这种情况。你直接把纵坐标锁死在特异性引物的最高值就好了。

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2楼2023-10-31 14:05:34
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xiaoys66

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能你目标菌的丰度太低了
ct值在15-35比较正常
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3楼2023-11-14 10:53:09
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