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hsjzhhh

新虫 (初入文坛)

[求助] qPCR为什么数据总是有问题,求助求助!!! 已有1人参与

我提取的粪便总DNA然后做qPCR比较目标菌的丰度,我通用引物选择的338F和518R,特异性引物是师姐之前做过的序列相同,但是!!每次特异性引物都扩不出来,峰很小,ct在39左右,通用引物熔解曲线倒是正常,不过ct值在9左右,而且数据都很匀,这到底是怎么回事呀,我应该怎么调整才能做出来呀!!!!
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momo莫模

新虫 (小有名气)

峰低应该是因为通用的那个太高了,纵坐标是扩增效率吧?我以前用不同种类的探针就会有这种情况。你直接把纵坐标锁死在特异性引物的最高值就好了。

发自小木虫Android客户端
2楼2023-10-31 14:05:34
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xiaoys66

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能你目标菌的丰度太低了
ct值在15-35比较正常
3楼2023-11-14 10:53:09
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