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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Jarnnney

新虫 (小有名气)

[求助] BSA封闭磁珠立马出现聚沉

我的磁珠和cdna在PBST中(PH7.4)37度偶联4.5h,之后加入含1%BSA的PBST(PH7.4)封闭时 立马聚沉,而且颜色由土黄色变成了铁锈红,这是为什么呢?

@liubin 发自小木虫IOS客户端
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xql2023

新虫 (小有名气)

2楼2023-10-07 15:37:40
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Jarnnney

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xql2023 at 2023-10-07 15:37:40
需要调节PH

我试过PH6.0的条件偶联后加入含BSA的PBST,依然是立刻出现沉淀。 哪怕是刚取出的磁珠母液加入封闭液也是立马沉淀。这是为什么呢?  而且我不论是在PH7.4还是6.0的体系,都偶联不上适配体

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3楼2023-10-08 13:34:43
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xql2023

新虫 (小有名气)

你的羧基磁珠和蛋白混合必然会聚沉,两种物质一正一负的电荷。你PH值调到8~9看看

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4楼2023-10-10 12:05:17
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xql2023

新虫 (小有名气)

5楼2023-10-10 12:07:25
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Jarnnney

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xql2023 at 2023-10-10 12:05:17
你的羧基磁珠和蛋白混合必然会聚沉,两种物质一正一负的电荷。你PH值调到8~9看看

偶联结束清洗了。 现在不是明显的聚沉,就是从之前的那种融化的巧克力的丝滑感变成稍微沙沙的感觉,颜色也氧化变深棕红。目前最大的问题是,磁珠偶联不上适配体,而且偶联液上清的吸光值不降反增,这是为什么呢?

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6楼2023-10-15 00:07:44
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xql2023

新虫 (小有名气)

-?EDC可能失活,建议尝试新鲜配制的?EDC。

-?Sulfo-NHS中间体可能已经水解,EDC和SulfoNHS?需即配即用。

-?蛋白量不足,建议提高包被浓度

-?羧基活化后直接加入蛋白。

-?避免引入带有氨基基团的蛋白及复合物引起竞争反应

-?调整包被缓冲液或?PH。

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7楼2023-10-15 10:06:10
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xql2023

新虫 (小有名气)

上条是偶联效果不高可能的原因,磁珠聚合也可以超声试试

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8楼2023-10-15 10:07:27
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xql2023

新虫 (小有名气)

还有你的磁珠羧基密度是多少?

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2023-10-15 10:09:33
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Jarnnney

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by xql2023 at 2023-10-15 10:09:33
还有你的磁珠羧基密度是多少?

前辈您好,不知道能不能加微信交流一下相关问题呢Jarnnney258

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10楼2023-11-03 00:39:04
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