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Jarnnney

新虫 (小有名气)

[求助] BSA封闭磁珠立马出现聚沉

我的磁珠和cdna在PBST中(PH7.4)37度偶联4.5h,之后加入含1%BSA的PBST(PH7.4)封闭时 立马聚沉,而且颜色由土黄色变成了铁锈红,这是为什么呢?

@liubin 发自小木虫IOS客户端
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xql2023

新虫 (小有名气)

-?EDC可能失活,建议尝试新鲜配制的?EDC。

-?Sulfo-NHS中间体可能已经水解,EDC和SulfoNHS?需即配即用。

-?蛋白量不足,建议提高包被浓度

-?羧基活化后直接加入蛋白。

-?避免引入带有氨基基团的蛋白及复合物引起竞争反应

-?调整包被缓冲液或?PH。

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7楼2023-10-15 10:06:10
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xql2023

新虫 (小有名气)

2楼2023-10-07 15:37:40
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Jarnnney

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xql2023 at 2023-10-07 15:37:40
需要调节PH

我试过PH6.0的条件偶联后加入含BSA的PBST,依然是立刻出现沉淀。 哪怕是刚取出的磁珠母液加入封闭液也是立马沉淀。这是为什么呢?  而且我不论是在PH7.4还是6.0的体系,都偶联不上适配体

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3楼2023-10-08 13:34:43
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xql2023

新虫 (小有名气)

你的羧基磁珠和蛋白混合必然会聚沉,两种物质一正一负的电荷。你PH值调到8~9看看

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4楼2023-10-10 12:05:17
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