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PCR新手必看已有2人参与
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最近学习定量PCR和数字PCR，然后就遇到各种PCR技术，PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR和ddPCR，有几个长得好像，怎么区分呢？今天一举搞定它。 01、普通PCR PCR是普通PCR，以双链DNA为模板，以dNTP为底物，特异性地扩增双链DNA。然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行检测，只能做定性分析。 02、实时荧光定量PCR qPCR和Real-time PCR是实时荧光定量PCR，以cDNA为模板，以dNTP为底物，对扩增出的DNA进行定量分析。实时荧光定量PCR常用的方法：水解探针法和荧光染料法。 03、逆转录PCR RT-PCR 是逆转录PCR，采用 Oligo（dT） 或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA，再以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增，结果只能定性，不能定量。 04、实时荧光定量逆转录PCR RT-qPCR是实时荧光定量逆转录PCR，是qPCR+RT-PCR的组合，将总RNA或mRNA逆转录成cDNA后再作为模板，以dNTP为底物，进行qPCR的定量分析。 05、数字PCR dPCR是数字PCR即三代PCR，是一种能够实现核酸绝对定量的精准检测技术，基于泊松分布原理将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元（纳升级）中，使每个反应室中平均只有一个拷贝或者没有目标DNA分子，然后加入荧光信号进行扩增，从而实现靶标核酸分子的绝对计数，提高检测灵敏度和准确度。 Q 各种PCR的全称 A: ① 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR） ②实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR） ③ 逆转录PCR（RT-PCR） ④实时荧光定量逆转录PCR（Real-time RT-PCR，RT-qPCR） 数字PCR（Digital PCR，Dig-PCR，dPCR） |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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聚合酶链式反应（PCR），即DNA扩增法，是一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术。这种技术最早是在1983年被美国的mullis提出，并于1985年被发明。PCR技术从发明至今已有35年历史，技术发展相对成熟。 PCR技术发展至今已至第三代，经历了定性PCR技术、定量PCR技术（qPCR）与数字PCR技术（dPCR）三个阶段。不同阶段的PCR技术的特点、应用情况与行业发展情况也不尽相同。 数字PCR（digital pcr，dPCR）是20世纪90年代末发展起来的一种核酸分子绝对定量技术。dPCR检测过程主要包括样品的分散、PCR扩增、荧光信号采集与数据分析。试验结果通过对反应单元总数和阳性反应单元数目进行统计，根据泊松分布公式计算出DNA模板分子的起始浓度，从而实现绝对定量。 数字PCR与荧光定量PCR不同点，主要体现在数字PCR需要进行分区后扩增，而荧光定量PCR是不需要分区扩增，而这种分区即可实现核酸分子的单分子扩增，单分子扩增既可以提高扩增效率，同时可以提高荧光检测的灵敏性和数据的可重复性。 |
2楼2024-03-19 09:52:25
0405lanfeng
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