| 查看: 1363 | 回复: 2 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
PCR新手必看 已有2人参与
|
|||
|
最近学习定量PCR和数字PCR，然后就遇到各种PCR技术，PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR和ddPCR，有几个长得好像，怎么区分呢？今天一举搞定它。 01、普通PCR PCR是普通PCR，以双链DNA为模板，以dNTP为底物，特异性地扩增双链DNA。然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行检测，只能做定性分析。 02、实时荧光定量PCR qPCR和Real-time PCR是实时荧光定量PCR，以cDNA为模板，以dNTP为底物，对扩增出的DNA进行定量分析。实时荧光定量PCR常用的方法：水解探针法和荧光染料法。 03、逆转录PCR RT-PCR 是逆转录PCR，采用 Oligo（dT） 或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA，再以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增，结果只能定性，不能定量。 04、实时荧光定量逆转录PCR RT-qPCR是实时荧光定量逆转录PCR，是qPCR+RT-PCR的组合，将总RNA或mRNA逆转录成cDNA后再作为模板，以dNTP为底物，进行qPCR的定量分析。 05、数字PCR dPCR是数字PCR即三代PCR，是一种能够实现核酸绝对定量的精准检测技术，基于泊松分布原理将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元（纳升级）中，使每个反应室中平均只有一个拷贝或者没有目标DNA分子，然后加入荧光信号进行扩增，从而实现靶标核酸分子的绝对计数，提高检测灵敏度和准确度。 Q 各种PCR的全称 A: ① 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR） ②实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR） ③ 逆转录PCR（RT-PCR） ④实时荧光定量逆转录PCR（Real-time RT-PCR，RT-qPCR） 数字PCR（Digital PCR，Dig-PCR，dPCR） |
回复此楼» 猜你喜欢
可以准确的通过filecode判断基金中还是不中。
已经有15人回复
-
感觉普通人已经没办法玩了，躺平是唯一的出路。
已经有26人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有236人回复
-
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
0405lanfeng
新虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 1643.5
- 红花: 2
- 帖子: 318
- 在线: 82.6小时
- 虫号: 1889442
- 注册: 2012-07-12
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
3楼2024-04-03 22:26:29
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
聚合酶链式反应（PCR），即DNA扩增法，是一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术。这种技术最早是在1983年被美国的mullis提出，并于1985年被发明。PCR技术从发明至今已有35年历史，技术发展相对成熟。 PCR技术发展至今已至第三代，经历了定性PCR技术、定量PCR技术（qPCR）与数字PCR技术（dPCR）三个阶段。不同阶段的PCR技术的特点、应用情况与行业发展情况也不尽相同。 数字PCR（digital pcr，dPCR）是20世纪90年代末发展起来的一种核酸分子绝对定量技术。dPCR检测过程主要包括样品的分散、PCR扩增、荧光信号采集与数据分析。试验结果通过对反应单元总数和阳性反应单元数目进行统计，根据泊松分布公式计算出DNA模板分子的起始浓度，从而实现绝对定量。 数字PCR与荧光定量PCR不同点，主要体现在数字PCR需要进行分区后扩增，而荧光定量PCR是不需要分区扩增，而这种分区即可实现核酸分子的单分子扩增，单分子扩增既可以提高扩增效率，同时可以提高荧光检测的灵敏性和数据的可重复性。 |
2楼2024-03-19 09:52:25
