应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » Crisp-cas9敲除
51/1返回列表
查看: 1834  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hlp0809

新虫 (小有名气)

[交流] Crisp-cas9敲除 已有3人参与

有没有做过基因敲除的大佬，gibosn构建好的左右500bp同源臂和N20质粒，为什么后面诱导编辑失败呢？敲除不成功需要注意那些事项呢？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2023-06-25 00:39:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨ry

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by lzk234 at 2023-07-05 17:07:29
阿拉伯糖诱导浓度提高一下，终浓度提高到100-150mM再去试一下，望成功哈。

大佬 我想问问我做cas9的时候，第一次预实验诱导cas9和重组酶表达，转化sgRNA质粒后，重组子都是正确的，后面再重复的时候，全是假阳性，有的长的很多，有的长的少；
不诱导cas9转化sgRNA质粒，预实验的时候克隆长得很多一个板几百个符合预期，但后面重复的时候就长得很少四五个这样子，但也都是假阳性，sgRNA的质粒就是第一次提出来的那些，是一样的，这是什么情况呢
赞一下 回复此楼
3楼2023-07-07 11:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

lzk234

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阿拉伯糖诱导浓度提高一下，终浓度提高到100-150mM再去试一下，望成功哈。
赞一下 回复此楼
2楼2023-07-05 17:07:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzk234

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 杨ry at 2023-07-07 04:18:52
大佬 我想问问我做cas9的时候，第一次预实验诱导cas9和重组酶表达，转化sgRNA质粒后，重组子都是正确的，后面再重复的时候，全是假阳性，有的长的很多，有的长的少；
不诱导cas9转化sgRNA质粒，预实验的时候克隆长 ...

基因组修复分为同源重组修复和非同源重组修复，可能都是非同源重组修复吧，还有就是有些菌都逃过Cas9的切割了，然后被切的没有及时修复自身的基因组都死掉了，所以长出来的都是不对的，所以还是建议提高同源重组酶的诱导浓度。
赞一下 回复此楼
4楼2023-07-11 15:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hlp0809

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lzk234 at 2023-07-05 17:07:29
阿拉伯糖诱导浓度提高一下，终浓度提高到100-150mM再去试一下，望成功哈。

感谢感谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
5楼2023-07-21 12:40:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 7/350 2026-11-15 03:10 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-15 00:24 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-14 22:39 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 8/400 2026-11-14 22:20 by Equinoxhua
[考博] 27博士 +6 锦鲤送福至 2026-11-10 6/300 2026-11-14 21:23 by xupeii
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 gRND4NVAZ8VG 2026-11-11 5/250 2026-11-13 11:15 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:31 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:03 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:36 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-12 10:03 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 5/250 2026-11-12 08:15 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 06:03 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-12 00:44 by 9fOTqj074tIg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭