应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » Crisp-cas9敲除
51/1返回列表
查看: 1767  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hlp0809

新虫 (小有名气)

[交流] Crisp-cas9敲除 已有3人参与

有没有做过基因敲除的大佬，gibosn构建好的左右500bp同源臂和N20质粒，为什么后面诱导编辑失败呢？敲除不成功需要注意那些事项呢？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2023-06-25 00:39:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨ry

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by lzk234 at 2023-07-05 17:07:29
阿拉伯糖诱导浓度提高一下，终浓度提高到100-150mM再去试一下，望成功哈。

大佬 我想问问我做cas9的时候，第一次预实验诱导cas9和重组酶表达，转化sgRNA质粒后，重组子都是正确的，后面再重复的时候，全是假阳性，有的长的很多，有的长的少；
不诱导cas9转化sgRNA质粒，预实验的时候克隆长得很多一个板几百个符合预期，但后面重复的时候就长得很少四五个这样子，但也都是假阳性，sgRNA的质粒就是第一次提出来的那些，是一样的，这是什么情况呢
赞一下 回复此楼
3楼2023-07-07 11:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

lzk234

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阿拉伯糖诱导浓度提高一下，终浓度提高到100-150mM再去试一下，望成功哈。
赞一下 回复此楼
2楼2023-07-05 17:07:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzk234

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 杨ry at 2023-07-07 04:18:52
大佬 我想问问我做cas9的时候，第一次预实验诱导cas9和重组酶表达，转化sgRNA质粒后，重组子都是正确的，后面再重复的时候，全是假阳性，有的长的很多，有的长的少；
不诱导cas9转化sgRNA质粒，预实验的时候克隆长 ...

基因组修复分为同源重组修复和非同源重组修复，可能都是非同源重组修复吧，还有就是有些菌都逃过Cas9的切割了，然后被切的没有及时修复自身的基因组都死掉了，所以长出来的都是不对的，所以还是建议提高同源重组酶的诱导浓度。
赞一下 回复此楼
4楼2023-07-11 15:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hlp0809

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lzk234 at 2023-07-05 17:07:29
阿拉伯糖诱导浓度提高一下，终浓度提高到100-150mM再去试一下，望成功哈。

感谢感谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
5楼2023-07-21 12:40:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +10 Kittylucky 2026-08-27 11/550 2026-08-28 10:45 by Kittylucky
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +11 晴天加油 2026-08-26 12/600 2026-08-28 01:22 by li09465290@
[基金申请] 基金不中，共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[职场人生] 学生撞见辅导员送外卖，第二天全班都沉默了 +3 鲸鱼融金_浙江_� 2026-08-22 3/150 2026-08-26 09:01 by zzuzxg
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭