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落泪天使

新虫 (初入文坛)

[交流] 载体酶切验证

我将自己拿到的片段插入PBI121载体中,PCR验证时,我的目的条带有,但是酶切验证的时候,没有条带,为什么?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:07 ]
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

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引用回帖:
Originally posted by 落泪天使 at 2009-9-30 10:52:
我将自己拿到的片段插入PBI121载体中,PCR验证时,我的目的条带有,但是酶切验证的时候,没有条带,为什么?

原因可能有很多。
1.PCR验证的时候有没有做个阴性对照?如果阴性对照也能拉出目的条带,这说明片段可能没插入。
2.片段可能插入了,但是酶切的有问题。如酶,Buffer等,或者在酶切位点的选择上。
2楼2009-09-30 11:07:21
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anik

银虫 (正式写手)

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酶切位点是否正确?
PCR有没有作阴性对照?
3楼2009-09-30 11:19:05
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sunqx

木虫 (著名写手)

PCR反应体系被污染了
4楼2009-09-30 14:30:11
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kitty8682

金虫 (正式写手)


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再看一下酶切位点有没有问题吧
5楼2009-09-30 15:50:22
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695

木虫 (职业作家)


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这个问题我在做5RACE的时候也碰到过,还不止一两次,不过我没怎么追究,好在我找到了两个正确的质粒,祝你好运
6楼2009-09-30 23:47:04
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plantst5928

铜虫 (小有名气)

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这很正常,原因也很多,可能是你的酶切位点的问题,也可能是你的酶切的时候的试剂的问题,或者就是你的PCR验证的时候的条带不是你的目的带,如果目的带太大,最好不要用M13引物验证,用基因的特异引物去验证。
7楼2009-10-04 23:00:07
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lzhwin

木虫 (正式写手)


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PCR的假阳性吧?比起菌落PCR我更相信酶切鉴定的结果
8楼2009-10-06 13:16:49
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寒山拾得

木虫 (小有名气)


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用载体上的序列,进行PCR验证最好。
9楼2009-10-06 14:10:31
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

PCR不准的
小木虫之有关部门负责人
10楼2009-10-06 14:12:04
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