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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 载体酶切验证
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落泪天使

新虫 (初入文坛)

[交流] 载体酶切验证

我将自己拿到的片段插入PBI121载体中，PCR验证时，我的目的条带有，但是酶切验证的时候，没有条带，为什么？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:07 ]
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1楼 2009-09-30 10:52:23
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0): 10-7 21:22
引用回帖:
Originally posted by 落泪天使 at 2009-9-30 10:52:
我将自己拿到的片段插入PBI121载体中，PCR验证时，我的目的条带有，但是酶切验证的时候，没有条带，为什么？

原因可能有很多。
1.PCR验证的时候有没有做个阴性对照？如果阴性对照也能拉出目的条带，这说明片段可能没插入。
2.片段可能插入了，但是酶切的有问题。如酶，Buffer等，或者在酶切位点的选择上。
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2楼2009-09-30 11:07:21
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anik

银虫 (正式写手)
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amisking(金币+1,VIP+0): 10-7 21:22
酶切位点是否正确？
PCR有没有作阴性对照？
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3楼2009-09-30 11:19:05
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sunqx

木虫 (著名写手)
PCR反应体系被污染了
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4楼2009-09-30 14:30:11
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kitty8682

金虫 (正式写手)
★
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再看一下酶切位点有没有问题吧
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5楼2009-09-30 15:50:22
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695

木虫 (职业作家)
★
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这个问题我在做5RACE的时候也碰到过，还不止一两次，不过我没怎么追究，好在我找到了两个正确的质粒，祝你好运
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6楼2009-09-30 23:47:04
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 21:22
这很正常，原因也很多，可能是你的酶切位点的问题，也可能是你的酶切的时候的试剂的问题，或者就是你的PCR验证的时候的条带不是你的目的带，如果目的带太大，最好不要用M13引物验证，用基因的特异引物去验证。
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7楼2009-10-04 23:00:07
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★
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PCR的假阳性吧？比起菌落PCR我更相信酶切鉴定的结果
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8楼2009-10-06 13:16:49
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寒山拾得

木虫 (小有名气)
★
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用载体上的序列，进行PCR验证最好。
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9楼2009-10-06 14:10:31
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
PCR不准的
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小木虫之有关部门负责人
10楼2009-10-06 14:12:04
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