载体酶切验证 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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Ella14

银虫 (小有名气)

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1.pcr 假阳性，用空载体做个阴性对照
2.酶切有问题哈，重做一次看～
3.可能序列酶的识别位点被甲基化不能识别
4.拿去测序看看

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11楼2009-10-06 14:25:50

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heismeng

金虫 (小有名气)

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直接测序我一般都是先做pcr 如果有就直接测序
没有的话考虑酶切一般都是pcr不准
不过也可能是你酶切的时候出错了先测序看看吧

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12楼2009-10-06 14:28:58

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fxiang1012

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检查下酶的活性吧，试验中出现的差错

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13楼2009-10-06 17:35:14

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gyesang

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1.看看酶切位点有没有问题
2.看看酶切位点是不是甲基化了
3.换用载体上其他酶切位点再切试试看

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14楼2009-10-07 09:35:13

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houcaixia

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这种情况在实验中出现很正常，你在做PCR的时候可以做一个阳性对照和一个阴性对照，这样也可以验证一下基因是否转进去了。另外如果酶切的时候没有出现所需条带，可以看一下条带所在位置是多大，如果刚好和载体加基因的片段大小一样的话就可能转进去了，但是在双酶切的时候没有切开；如果条带所在位置和空质粒的位置一致，可能就是基因没有转进去，我们现在所做的一个就是，已经转进去了，但是无论如何就是切不下来。其实也可以做一个诱导表达，看是否有所需的蛋白条带出现。

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15楼2009-10-07 19:23:54

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