应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 载体酶切验证
202/2返回列表上一页12
查看: 2052  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

Ella14

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+5,VIP+0): 10-7 21:23
1.pcr 假阳性，用空载体做个阴性对照
2.酶切有问题哈，重做一次看～
3.可能序列酶的识别位点被甲基化不能识别
4.拿去测序看看
赞一下(11人) 回复此楼
11楼2009-10-06 14:25:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 21:23
直接测序 我一般都是先做pcr 如果有就直接测序
没有的话考虑酶切 一般都是pcr不准
不过也可能是你酶切的时候出错了 先测序看看吧
赞一下(11人) 回复此楼
12楼2009-10-06 14:28:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fxiang1012

金虫 (正式写手)
检查下酶的活性吧，试验中出现的差错
赞一下 回复此楼
13楼2009-10-06 17:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
amisking(金币+1,VIP+0): 10-7 21:23
1.看看酶切位点有没有问题
2.看看酶切位点是不是甲基化了
3.换用载体上其他酶切位点再切试试看
赞一下(10人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
14楼2009-10-07 09:35:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houcaixia

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+4,VIP+0): 10-7 21:23
这种情况在实验中出现很正常，你在做PCR的时候可以做一个阳性对照和一个阴性对照，这样也可以验证一下基因是否转进去了。另外如果酶切的时候没有出现所需条带，可以看一下条带所在位置是多大，如果刚好和载体加基因的片段大小一样的话就可能转进去了，但是在双酶切的时候没有切开；如果条带所在位置和空质粒的位置一致，可能就是基因没有转进去，我们现在所做的一个就是，已经转进去了，但是无论如何就是切不下来。其实也可以做一个诱导表达，看是否有所需的蛋白条带出现。
赞一下(11人) 回复此楼
15楼2009-10-07 19:23:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hzjlan

银虫 (小有名气)
质粒跟目的条带分子量相差远吗？
赞一下 回复此楼
16楼2009-10-07 21:21:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
pcr后最好是测序验证一下。这样比较好
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2009-10-08 07:37:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuezhen

银虫 (小有名气)
学习一下！
回复此楼
18楼2009-10-08 10:03:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落泪天使

新虫 (初入文坛)
我曾经用重组的质粒进行PCR，并做了阴性对照和阳性对照，阴性对照没有条带。而重组质粒有我的目的条带。
酶切已经做过好几次了，是不是因为酶切的量少啊，我用的是500ng.量少吗？
请指导！
赞一下 回复此楼
19楼2009-10-09 16:25:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungi1205

金虫 (正式写手)
1.用载体上的序列，进行PCR验证最好
2.比起菌落PCR我更相信酶切鉴定的结果
赞一下 回复此楼
加油，发挥人生最大的热量温暖身边的人
20楼2009-10-18 02:05:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 落泪天使 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求材料，环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 0854 考研调剂 招生了！AI 方向 +4 pk3725069 2026-03-19 16/800 2026-03-23 23:09 by 汪！？！
[考研] 070300化学求调剂 +8 苑豆豆 2026-03-20 8/400 2026-03-23 20:57 by baobaoye
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +7 生物工程调剂 2026-03-17 12/600 2026-03-23 18:18 by YMU施老师
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭