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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 载体酶切验证
汕头大学海洋科学接受调剂
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Ella14

银虫 (小有名气)
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amisking(金币+5,VIP+0): 10-7 21:23
1.pcr 假阳性，用空载体做个阴性对照
2.酶切有问题哈，重做一次看～
3.可能序列酶的识别位点被甲基化不能识别
4.拿去测序看看
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11楼2009-10-06 14:25:50
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heismeng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 21:23
直接测序 我一般都是先做pcr 如果有就直接测序
没有的话考虑酶切 一般都是pcr不准
不过也可能是你酶切的时候出错了 先测序看看吧
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12楼2009-10-06 14:28:58
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fxiang1012

金虫 (正式写手)
检查下酶的活性吧，试验中出现的差错
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13楼2009-10-06 17:35:14
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
amisking(金币+1,VIP+0): 10-7 21:23
1.看看酶切位点有没有问题
2.看看酶切位点是不是甲基化了
3.换用载体上其他酶切位点再切试试看
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
14楼2009-10-07 09:35:13
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houcaixia

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
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amisking(金币+4,VIP+0): 10-7 21:23
这种情况在实验中出现很正常，你在做PCR的时候可以做一个阳性对照和一个阴性对照，这样也可以验证一下基因是否转进去了。另外如果酶切的时候没有出现所需条带，可以看一下条带所在位置是多大，如果刚好和载体加基因的片段大小一样的话就可能转进去了，但是在双酶切的时候没有切开；如果条带所在位置和空质粒的位置一致，可能就是基因没有转进去，我们现在所做的一个就是，已经转进去了，但是无论如何就是切不下来。其实也可以做一个诱导表达，看是否有所需的蛋白条带出现。
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15楼2009-10-07 19:23:54
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hzjlan

银虫 (小有名气)
质粒跟目的条带分子量相差远吗？
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16楼2009-10-07 21:21:41
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
★
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pcr后最好是测序验证一下。这样比较好
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17楼2009-10-08 07:37:52
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xuezhen

银虫 (小有名气)
学习一下！
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18楼2009-10-08 10:03:23
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落泪天使

新虫 (初入文坛)
我曾经用重组的质粒进行PCR，并做了阴性对照和阳性对照，阴性对照没有条带。而重组质粒有我的目的条带。
酶切已经做过好几次了，是不是因为酶切的量少啊，我用的是500ng.量少吗？
请指导！
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19楼2009-10-09 16:25:47
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fungi1205

金虫 (正式写手)
1.用载体上的序列，进行PCR验证最好
2.比起菌落PCR我更相信酶切鉴定的结果
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加油，发挥人生最大的热量温暖身边的人
20楼2009-10-18 02:05:05
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