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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 载体酶切验证
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落泪天使

新虫 (初入文坛)

[交流] 载体酶切验证

我将自己拿到的片段插入PBI121载体中，PCR验证时，我的目的条带有，但是酶切验证的时候，没有条带，为什么？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:07 ]
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1楼 2009-09-30 10:52:23
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 21:22
这很正常，原因也很多，可能是你的酶切位点的问题，也可能是你的酶切的时候的试剂的问题，或者就是你的PCR验证的时候的条带不是你的目的带，如果目的带太大，最好不要用M13引物验证，用基因的特异引物去验证。
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7楼2009-10-04 23:00:07
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
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amisking(金币+3,VIP+0): 10-7 21:22
引用回帖:
Originally posted by 落泪天使 at 2009-9-30 10:52:
我将自己拿到的片段插入PBI121载体中，PCR验证时，我的目的条带有，但是酶切验证的时候，没有条带，为什么？

原因可能有很多。
1.PCR验证的时候有没有做个阴性对照？如果阴性对照也能拉出目的条带，这说明片段可能没插入。
2.片段可能插入了，但是酶切的有问题。如酶，Buffer等，或者在酶切位点的选择上。
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2楼2009-09-30 11:07:21
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anik

银虫 (正式写手)
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amisking(金币+1,VIP+0): 10-7 21:22
酶切位点是否正确？
PCR有没有作阴性对照？
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3楼2009-09-30 11:19:05
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sunqx

木虫 (著名写手)
PCR反应体系被污染了
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4楼2009-09-30 14:30:11
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