应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR的线性质粒片段连接不上
51/1返回列表
查看: 1265  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者凉宫春日团长将赠送您 5 个金币

凉宫春日团长

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR的线性质粒片段连接不上 已有3人参与

我想去除质粒上的十几个碱基，所以在这十几个碱基的两端设计了引物，然后加上同一个酶切位点，计划酶切后直接连接，让酶切后的PCR线性质粒连接成环。用的sal1酶切位点，连接用的T4。
连接产物跑胶后，只看到了线性质粒条带，没有环状的。菌落PCR也没有阳性的。
各位大佬有做过的嘛，可以指点一下吗。

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2023-04-20 15:52:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KM石头

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是没加保护碱基，酶切位点没有切开？
赞一下 回复此楼
2楼2023-04-23 10:17:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

627455987

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

反向PCR然后DpnI消化可以吗
赞一下 回复此楼
3楼2023-04-24 08:40:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BOSS1104

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般做的不顺利是设计的问题  有需要联系我们  我们可以代做
赞一下 回复此楼
4楼2023-04-24 15:47:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

five56

新虫 (小有名气)
楼主现在解决了吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2023-07-05 20:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凉宫春日团长 的主题更新
51/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+5 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 19/950 2026-04-13 10:25 by Faiz5552
[考研] 化学070300 求调剂 +17 哈哈哈^_^ 2026-04-12 17/850 2026-04-13 08:59 by 紫曦紫棋
[考研] 272分材料子求调剂 +40 Loy0361 2026-04-10 52/2600 2026-04-12 19:23 by laoshidan
[考研] 药学求调剂 +3 RussHu 2026-04-12 4/200 2026-04-12 17:49 by 陈皮皮
[考研] 326求调剂 +6 Shansyn 2026-04-10 6/300 2026-04-12 09:46 by hammer3
[考研] 药学305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-10 8/400 2026-04-12 00:07 by zhouwenxian
[考研] 290求调剂 +13 luoziheng 2026-04-10 13/650 2026-04-11 23:15 by labixiaoqiao
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-06 10/500 2026-04-11 10:36 by 紫曦紫棋
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 中科院总分315求调剂 +8 lallalh 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:30 by dick_runner
[考研] 347材料专硕求调剂 +19 zj8215216 2026-04-06 19/950 2026-04-10 09:36 by 690616278
[考研] 297求调剂 +27 GENJIOW 2026-04-07 30/1500 2026-04-09 23:20 by wolf97
[考研] 材料工程322 +18 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 19/950 2026-04-09 10:44 by cymywx
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
[考研] 081200-11408-367学硕求调剂 +4 1_2_3111 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:13 by jp9609
[考研] 22408 331分求调剂 +4 y__1 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:26 by 土木硕士招生
[考研] 求助 +3 卡卡东88 2026-04-06 4/200 2026-04-06 15:28 by going home
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭