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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR的线性质粒片段连接不上
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凉宫春日团长

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR的线性质粒片段连接不上 已有3人参与

我想去除质粒上的十几个碱基，所以在这十几个碱基的两端设计了引物，然后加上同一个酶切位点，计划酶切后直接连接，让酶切后的PCR线性质粒连接成环。用的sal1酶切位点，连接用的T4。
连接产物跑胶后，只看到了线性质粒条带，没有环状的。菌落PCR也没有阳性的。
各位大佬有做过的嘛，可以指点一下吗。

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1楼 2023-04-20 15:52:52
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KM石头

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是没加保护碱基，酶切位点没有切开？
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2楼2023-04-23 10:17:13
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627455987

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

反向PCR然后DpnI消化可以吗
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3楼2023-04-24 08:40:13
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BOSS1104

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般做的不顺利是设计的问题  有需要联系我们  我们可以代做
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4楼2023-04-24 15:47:49
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five56

新虫 (小有名气)
楼主现在解决了吗

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5楼2023-07-05 20:46:51
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