应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR的线性质粒片段连接不上
51/1返回列表
查看: 1223  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者凉宫春日团长将赠送您 5 个金币

凉宫春日团长

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR的线性质粒片段连接不上 已有3人参与

我想去除质粒上的十几个碱基，所以在这十几个碱基的两端设计了引物，然后加上同一个酶切位点，计划酶切后直接连接，让酶切后的PCR线性质粒连接成环。用的sal1酶切位点，连接用的T4。
连接产物跑胶后，只看到了线性质粒条带，没有环状的。菌落PCR也没有阳性的。
各位大佬有做过的嘛，可以指点一下吗。

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2023-04-20 15:52:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KM石头

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是没加保护碱基，酶切位点没有切开？
赞一下 回复此楼
2楼2023-04-23 10:17:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

627455987

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

反向PCR然后DpnI消化可以吗
赞一下 回复此楼
3楼2023-04-24 08:40:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BOSS1104

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般做的不顺利是设计的问题  有需要联系我们  我们可以代做
赞一下 回复此楼
4楼2023-04-24 15:47:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

five56

新虫 (小有名气)
楼主现在解决了吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2023-07-05 20:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凉宫春日团长 的主题更新
51/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 新疆大学地质与矿业工程学院招生 +24 another12 2026-03-04 32/1600 2026-03-10 01:15 by 1111--
[考研] 标题:捡漏预警|08工科/09农学调剂!英语要求低，过线即有机会! +4 马超放烟花 2026-03-07 4/200 2026-03-09 23:54 by 拾三同学
[考研] 复试调剂 +5 呼呼？~+123456 2026-03-08 6/300 2026-03-09 21:32 by 呼呼？~+123456
[考研] 一志愿郑州大学，学硕，物理化学， 333求调剂 +7 李魔女斗篷 2026-03-04 8/400 2026-03-09 19:58 by L135790
[考研] 一志愿山东大学，总分327，英语二79，有论文，有竞赛，已过四六级 +3 木木目目1 2026-03-09 3/150 2026-03-09 19:52 by yuningshan
[考研] 0703求调剂 +10 c297914 2026-03-06 11/550 2026-03-09 18:37 by 30660438
[考研] 313分生物学求调剂 +4 Yyt杨1 2026-03-09 5/250 2026-03-09 13:42 by macy2011
[考研] 材料工程330分求调剂，一志愿985 +3 小材化本科 2026-03-07 3/150 2026-03-09 05:35 by houyaoxu
[考研] 理学287分求调剂 +4 看看我. 2026-03-05 4/200 2026-03-08 22:11 by qingfeng258
[基金申请] 进入个人成果库好难，一下午都没进去 +6 mi_dilee 2026-03-05 6/300 2026-03-08 11:43 by lan111
[考研] 求调剂，不管什么专业，我是可塑造的人才一枚，希望遇到知己老师捞捞我 +4 13102137290 2026-03-06 5/250 2026-03-07 21:21 by lissomchan
[考研] 一志愿211 化学305分求调剂 +3 0703杨悦305分 2026-03-05 3/150 2026-03-07 21:15 by yinhuanshun
[考研] 物理学求调剂 +3 sx宋 2026-03-05 3/150 2026-03-07 14:38 by lishahe
[考研] 276求调剂 本科天津工业大学 一志愿北京化工大学0855 +4 路lyh123 2026-03-06 6/300 2026-03-07 11:37 by shdliugang
[考研] 材料专硕290求调剂 +8 杰尼龟aaa 2026-03-04 8/400 2026-03-06 16:06 by @飒飒飒飒
[考研] 环境工程专硕307 一志愿211 四六级已过 求调剂 +5 ccc! 2026-03-03 6/300 2026-03-05 09:42 by 热情沙漠
[考研] 0703化学求调剂，总分320分，一志愿中南民族大学 +3 19286712440 2026-03-04 3/150 2026-03-04 18:30 by houyaoxu
[考研] 085600 材料与化工 298 +14 小西笑嘻嘻 2026-03-03 14/700 2026-03-04 16:23 by sslc1985
[考研] 281求调剂 +3 我是小小葱葱 2026-03-03 5/250 2026-03-04 14:23 by kakakapanpan
[考研] 292求调剂 +3 sgbl 2026-03-03 3/150 2026-03-03 17:30 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭