| 查看: 1036 | 回复: 10 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
bclz铁杆木虫 (正式写手)
|
[交流]
蛋白纯化
|
||
| 各位大侠啊，我们在比赤酵母酵母中表达一个10KD左右的蛋白，由于种种原因，没有加His标签，现在诱导表达后，上清中的蛋白怎么纯化啊？其实不要求纯度太高。。急问，先谢谢谢谢大家了 |
回复此楼» 猜你喜欢
07化学280分求调剂
已经有3人回复
-
考研化学308分求调剂
已经有8人回复
-
070300化学求调剂
已经有7人回复
-
生物学一志愿985，分数349求调剂
已经有9人回复
-
341求调剂(一志愿湖南大学070300)
已经有4人回复
-
336化工调剂
已经有5人回复
-
279分求调剂 一志愿211
已经有17人回复
-
291求调剂
已经有4人回复
-
328求调剂，英语六级551，有科研经历
已经有12人回复
-
一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂
已经有5人回复
2楼2009-09-28 11:17:22
bclz
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 12508.2
- 红花: 2
- 帖子: 892
- 在线: 94.5小时
- 虫号: 711915
- 注册: 2009-03-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
3楼2009-09-28 13:13:58
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
4楼2009-09-28 14:18:16
5楼2009-09-28 14:57:58
zhaocy8903
木虫 (知名作家)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3822.5
- 散金: 1238
- 红花: 17
- 帖子: 5798
- 在线: 1468.5小时
- 虫号: 636507
- 注册: 2008-10-25
- 专业: 微生物遗传育种学
6楼2009-09-28 14:58:20
bclz
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 12508.2
- 红花: 2
- 帖子: 892
- 在线: 94.5小时
- 虫号: 711915
- 注册: 2009-03-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
7楼2009-10-07 19:24:25
HarveyWang
捐助贵宾 (知名作家)
海外行者
- BioEPI: 14
- 应助: 80 (初中生)
- 金币: 2277.2
- 散金: 24
- 红花: 65
- 帖子: 6880
- 在线: 946小时
- 虫号: 528557
- 注册: 2008-03-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+5,VIP+0): 10-7 19:57
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+5,VIP+0): 10-7 19:57
|
楼主，我有这方面的经验， 你最好知道该蛋白的等电点， 如果不知道，就从pH7开始一直做到11 即： pH 7、8、9、10、11用各类缓冲液挂DEAE柱。 先装2mL的胶， 将离心很清亮的发酵液上清直接上就行， 一般可以上10-50个体积。 （酵母发酵液不易用硫酸铵沉淀来做，因为你会发现，沉淀的效率不高，这一步就相当于浓缩N倍的蛋白） 先让蛋白全部挂柱（离子交换法浓缩蛋白，^_^）， 这样可以大体估计该蛋白的等电点， 摸好挂柱条件后， 就再优化洗脱液的pH，一样是从pH7到11， 注意操作时发酵液穿出和洗脱液要随时收集蛋白峰， 然后走SDS-PAGE， 这样可以随时判断各种蛋白的挂柱洗脱pH条件。 最终，DEAE柱洗脱时收集目的蛋白洗脱峰的后半峰，那样会更纯些！ 许多时候，少量的蛋白样品，DEAE一个胶就基本搞定。 当然，这种纯化是不太考虑收率的哦。 [ Last edited by HarveyWang on 2009-10-7 at 19:54 ] |
8楼2009-10-07 19:49:33
9楼2009-10-07 21:19:09
bclz
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 12508.2
- 红花: 2
- 帖子: 892
- 在线: 94.5小时
- 虫号: 711915
- 注册: 2009-03-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
10楼2009-10-24 12:59:41
