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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于含卡那抗性载体的菌株生长缓慢问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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melodyxin

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于含卡那抗性载体的菌株生长缓慢问题

我将含有pET28a重组质粒的BL21菌株的甘油菌划线到平板活化后，挑单菌至5ml的LB（加50ug/ml卡那）过夜培养。可是培养了14h，菌液还是很稀很稀；看起来OD600不会超过0.4.

这是怎么回事啊？

请大家指教。。。。。。
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1楼 2009-09-26 09:17:04
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
很急，求教！！！
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2楼2009-09-26 09:20:54
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
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350784478(金币+1,VIP+0):感谢参与 9-26 10:03
想问下你活化用的平板放卡那了吗？
不知道你的表达菌存放多久了，保存重组质粒的菌株最好用DH5α，用表达菌株存重组质粒，时间久了，会导致质粒降解，放卡那当然就不长了。
建议用重组质粒再转化BL21.
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Thank-you，so-blue.
3楼2009-09-26 09:45:14
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-9-26 09:45:
想问下你活化用的平板放卡那了吗？
不知道你的表达菌存放多久了，保存重组质粒的菌株最好用DH5α，用表达菌株存重组质粒，时间久了，会导致质粒降解，放卡那当然就不长了。
建议用重组质粒再转化BL21.

啊？重新转化啊？
我放了一个半月，平板是放了卡那的。
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4楼2009-09-26 09:57:40
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
另外，如果直接从甘油管接种20ul到5ml的LB（含卡那）中，长势就还好。相当奇怪。
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5楼2009-09-26 10:00:40
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susizheng

木虫 (著名写手)

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引用回帖:
Originally posted by melodyxin at 2009-9-26 10:00:
另外，如果直接从甘油管接种20ul到5ml的LB（含卡那）中，长势就还好。相当奇怪。

是不是挑菌的时候没挑进去？液体接种当然就保险些。
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Thank-you，so-blue.
6楼2009-09-26 10:23:56
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
是这样吗？好吧。。。。我错了。。。
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7楼2009-09-26 11:08:44
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