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石辰风

铁虫 (小有名气)

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[求助] 新手求助SDS-PAGE相关问题

先上图

【电脑端图片上传的按键点不了啊，等等手机发到二楼】
然后说一下背景

用的是15%的分离胶，上层是彩色胶但是不具备浓缩作用，电泳电压是100v，电泳缓冲液都是新配的，胶两端是空白，中间从左到右分别是marker（10~180kb），BSA标准蛋白（0.125mg/ml），样品1（0.65mg/ml），样品2（1.28mg/ml），样品3（1.19mg/ml），样品4（约2.3g/ml），样品5（0.128mg/ml）marker，蛋白含量均用Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定，marker的上样量为6μl，橙红色条带为70kd，样品及空白的上样量为10μl。

样品1~4是从某中药动物药的冻干粉中提取的，提取方法为石油醚破碎脱脂后，挥尽石油醚，然后加入0.9%NaCl溶液超声破碎提取，提取后离心取上清液为总蛋白溶液，-80℃保存，也就是说上样的样品保存液为0.9%NaCl溶液。样品5则是某种动物分泌的液体。

跑电泳前，5xloading buffer10μl+样品和空白40μl混匀，然后煮5~10分钟，放凉后上样跑电泳。跑完电泳后，先在摇床上用蒸馏水把胶上没跑完的那些loading buffer部分洗掉了，大概洗了一个多小时，洗到胶上只有marker跑过的痕迹（其实不知道这步做的对不对，只是发现蒸馏水洗的时候可以洗掉就洗了），然后用考马斯亮蓝快速染色液在摇床上染色（不用脱色，染色时间大概2小时左右）。

介绍完了情况，说一下问题。
发现电泳图有以下几个问题：
1. Marker蹿到了别的条带
在网上查说是盐离子会导致蹿带，但是marker是没有盐离子的呀，难不成样品中的NaCl也会导致蹿带？而且都是往左边蹿的，这两个条带上的样都没有NaCl。
2.颜色很浅，染色效果不好
看人家的染的都是那种深蓝色效果很好
3.样品1~4的条带整个都是蓝色的，条带不明显
是不是蛋白保存溶液的问题？这种整个条带都是蓝色的是不是说明蛋白降解了。

求各位大神解答，希望大家多提建议，谢谢！

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