| 查看: 1295 | 回复: 2 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者石辰风将赠送您 5 个金币 | ||
[求助]
新手求助SDS-PAGE相关问题
|
||
|
先上图 【电脑端图片上传的按键点不了啊，等等手机发到二楼】 然后说一下背景 用的是15%的分离胶，上层是彩色胶但是不具备浓缩作用，电泳电压是100v，电泳缓冲液都是新配的，胶两端是空白，中间从左到右分别是marker（10~180kb），BSA标准蛋白（0.125mg/ml），样品1（0.65mg/ml），样品2（1.28mg/ml），样品3（1.19mg/ml），样品4（约2.3g/ml），样品5（0.128mg/ml）marker，蛋白含量均用Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定，marker的上样量为6μl，橙红色条带为70kd，样品及空白的上样量为10μl。 样品1~4是从某中药动物药的冻干粉中提取的，提取方法为石油醚破碎脱脂后，挥尽石油醚，然后加入0.9%NaCl溶液超声破碎提取，提取后离心取上清液为总蛋白溶液，-80℃保存，也就是说上样的样品保存液为0.9%NaCl溶液。样品5则是某种动物分泌的液体。 跑电泳前，5xloading buffer10μl+样品和空白40μl混匀，然后煮5~10分钟，放凉后上样跑电泳。跑完电泳后，先在摇床上用蒸馏水把胶上没跑完的那些loading buffer部分洗掉了，大概洗了一个多小时，洗到胶上只有marker跑过的痕迹（其实不知道这步做的对不对，只是发现蒸馏水洗的时候可以洗掉就洗了），然后用考马斯亮蓝快速染色液在摇床上染色（不用脱色，染色时间大概2小时左右）。 介绍完了情况，说一下问题。 发现电泳图有以下几个问题： 1. Marker蹿到了别的条带 在网上查说是盐离子会导致蹿带，但是marker是没有盐离子的呀，难不成样品中的NaCl也会导致蹿带？而且都是往左边蹿的，这两个条带上的样都没有NaCl。 2.颜色很浅，染色效果不好 看人家的染的都是那种深蓝色效果很好 3.样品1~4的条带整个都是蓝色的，条带不明显 是不是蛋白保存溶液的问题？这种整个条带都是蓝色的是不是说明蛋白降解了。 求各位大神解答，希望大家多提建议，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有90人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2023-03-31 16:49:47
3楼2023-03-31 16:50:53
