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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 茚三酮显色测氨基酸含量
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oase

金虫 (小有名气)

[交流] 茚三酮显色测氨基酸含量 已有20人参与

最近在做茚三酮测氨基酸含量实验，在做标准曲线时，连做了三次，发现每次结果都不一样，而且吸光度也不是线性（显色后颜色和浓度也不成比例）。我用亮氨酸做的，浓度梯度为0.06---0.3umol/ml. 茚三酮试剂（1g茚三酮溶于50ml95%乙醇），缓冲液用的pH5.4的2M醋酸缓冲液。反应时加标准液后，再加1ml缓冲液，1ml茚三酮，水浴15min,冷却静置5min后，加3ml60%乙醇，570nm比色。结果显色后有的没变色（仍为黄色），有的为蓝色，但是颜色和浓度不成比例。不知道哪出的问题？恳请各位做过相关实验的给点指导意见，谢谢了！

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-25 at 10:51 ]
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1楼 2009-09-24 23:16:01
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墨池

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zthy0000 at 2010-04-26 22:59:38:
不知道楼主的水浴温度是多少度，显色的话要煮沸15分钟的，还有就是冷却好后再定容到标准容量的比色管或容量瓶中，再测吸光值，一般线性没有问题的，我做过不少次，基本0.9990以上吧

您好，您所谓的“煮沸15分钟”是指，瓶里面的液体要沸呢，还是水浴的水必须是沸的？
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yanlyf
阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
8楼2010-11-18 19:10:47
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zthy0000

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不知道楼主的水浴温度是多少度，显色的话要煮沸15分钟的，还有就是冷却好后再定容到标准容量的比色管或容量瓶中，再测吸光值，一般线性没有问题的，我做过不少次，基本0.9990以上吧
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7楼2010-04-26 22:59:38
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普通回帖

oase

金虫 (小有名气)
咋没人啊？
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2楼2009-09-25 23:23:11
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
oase(金币+1,VIP+0): 9-26 15:50
很好，你所说的就是这样的，这个方法本来就很不准

氨基酸定量我们都用专用的 HPLC 柱子。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-09-26 05:46:10
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oase

金虫 (小有名气)
哦，不过我还是想试试这种方法，难倒真的就不准吗？
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4楼2009-09-26 15:52:35
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insnfeng

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们实验室也有同样的问题，无法解决！

标准曲线不是线性。
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5楼2010-03-22 15:42:05
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ellen_669

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也遇到了这个问题，也是解决不了，想问楼主现在解决了没
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6楼2010-04-26 15:51:59
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墨池

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by oase at 2009-09-24 23:16:01:
最近在做茚三酮测氨基酸含量实验，在做标准曲线时，连做了三次，发现每次结果都不一样，而且吸光度也不是线性（显色后颜色和浓度也不成比例）。我用亮氨酸做的，浓度梯度为0.06---0.3umol/ml. 茚三酮试剂（1g茚三 ...

您好，这个问题您解决了么？我也遇到同样的问题
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
9楼2010-11-18 19:15:36
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lx7225922

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我看过有些说的是反应过程不完全，或者是在反应过程中还有其他衍生物产生，所以不准确，还有温度的原因。
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10楼2012-05-23 09:07:10
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