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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求助SDS-PAGE

请各位虫虫看看，我的胶为什么下面总跑不开呢？总是模糊糊一片的！再就是胶凝的时间长短，有没有关系啊！时不时时间长一点，跑出来的会好点呢？还有胶的厚度，对最后的结果有影响么？现在实验室跑的电泳都是这样，大家知道是怎么回事不啊？很着急啊
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I am not a hero , but I served with heroes！
1楼 2009-09-22 18:34:33
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hong303030

金虫 (小有名气)
★
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应该是DNA降解的比较厉害，或者是引物的特异性不够好，应该不是跑胶的问题，凝胶我一般是半小时左右吧
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2楼2009-09-22 22:37:03
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sonyk

木虫 (小有名气)
★
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测一下Tris缓冲液的PH值看准不准！

[ Last edited by sonyk on 2009-9-22 at 22:49 ]
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3楼2009-09-22 22:48:32
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anik

银虫 (正式写手)
★
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Originally posted by wlt728 at 2009-9-22 18:34:
请各位虫虫看看，我的胶为什么下面总跑不开呢？总是模糊糊一片的！再就是胶凝的时间长短，有没有关系啊！时不时时间长一点，跑出来的会好点呢？还有胶的厚度，对最后的结果有影响么？现在实验室跑的电泳都是这样， ...

应该是蛋白质吧。应该设置对照阿。。。
SDS-PAGE的凝胶时间大约是40分钟，时间过长有可能是APS被氧化了，或者是TEMED时间过长或者量太少。如果凝胶时间过长，那么胶的孔径就会有变化（胶的孔径与TEMED的浓度有关，TEMED量大胶的孔径就变小），对结果是有些影响的，但是在一定范围内是没有多大影响的。

胶的厚度应该没有什么影响。我之前做过蛋白的，同时使用两种厚度的胶在一个电泳中跑，结果是没有多大的变化的。
如果你们实验室i的结果都是这样，那么最有可能的就是试剂的问题了。APS的几率比较大，换换新的试剂试试。
另外，你脱色并不完全。你可以将胶放置于开水中，大约煮10分钟吧，直至颜色变淡即可，此方法可以省去你长时间的脱色！
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4楼2009-09-22 22:50:06
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zijing5322

铁虫 (小有名气)
★
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你的带应该在哪个位置啊？没有对照，中间有一段跑的挺好的啊。
我做蛋白质时上样之前都会轻度离心一下，那样跑出来的带没有拖尾现象，比较清楚。
另外，缓冲液的配制很关键。。
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5楼2009-09-23 08:58:39
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HarveyWang

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海外行者
★
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这个的原因很多啊！

（1）样品处理问题。样品加Buffer后不能在常温下放置，应在10min内放入-20摄氏度冰箱冷冻。我就有过这样的经历，夏天在实验室的上一块胶和下一块胶跑出来就不一样，晚点跑的蛋白条带就模糊了！

（2）分离胶配置问题。 分离胶的SDS质量不够高，是很容易引起这个问题的！

（3）电泳缓冲液的SDS问题。

等等啦 。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2009-09-23 16:39:07
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stefa

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
Originally posted by wlt728 at 2009-9-22 18:34:
请各位虫虫看看，我的胶为什么下面总跑不开呢？总是模糊糊一片的！再就是胶凝的时间长短，有没有关系啊！时不时时间长一点，跑出来的会好点呢？还有胶的厚度，对最后的结果有影响么？现在实验室跑的电泳都是这样， ...

你的图用什么拍的啊  怎么这么清楚
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7楼2009-09-23 16:43:39
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HarveyWang

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海外行者
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Originally posted by stefa at 2009-9-23 16:43:

你的图用什么拍的啊  怎么这么清楚

那还用说，相机呗
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
8楼2009-09-23 19:45:35
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stefa

新虫 (小有名气)
★
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Originally posted by HarveyWang at 2009-9-23 19:45:


那还用说，相机呗

直接在托盘里拍的还是怎么？
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9楼2009-09-23 20:00:49
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HarveyWang

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海外行者
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Originally posted by stefa at 2009-9-23 20:00:

直接在托盘里拍的还是怎么？

我也这样拍过。把胶放在一块白色塑料板上拍的。
注意对焦和消除胶的反光，
拍出来的非常清晰！

白色塑料板是从菜市场上买的，
其实是一块 白色的塑料质的菜板，
不超过10块钱，
做背景很好用
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
10楼2009-09-23 21:18:11
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