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汕头大学海洋科学接受调剂
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求助SDS-PAGE

请各位虫虫看看,我的胶为什么下面总跑不开呢?总是模糊糊一片的!再就是胶凝的时间长短,有没有关系啊!时不时时间长一点,跑出来的会好点呢?还有胶的厚度,对最后的结果有影响么?现在实验室跑的电泳都是这样,大家知道是怎么回事不啊?很着急啊
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anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wlt728 at 2009-9-22 18:34:
请各位虫虫看看,我的胶为什么下面总跑不开呢?总是模糊糊一片的!再就是胶凝的时间长短,有没有关系啊!时不时时间长一点,跑出来的会好点呢?还有胶的厚度,对最后的结果有影响么?现在实验室跑的电泳都是这样, ...

应该是蛋白质吧。应该设置对照阿。。。
SDS-PAGE的凝胶时间大约是40分钟,时间过长有可能是APS被氧化了,或者是TEMED时间过长或者量太少。如果凝胶时间过长,那么胶的孔径就会有变化(胶的孔径与TEMED的浓度有关,TEMED量大胶的孔径就变小),对结果是有些影响的,但是在一定范围内是没有多大影响的。

胶的厚度应该没有什么影响。我之前做过蛋白的,同时使用两种厚度的胶在一个电泳中跑,结果是没有多大的变化的。
如果你们实验室i的结果都是这样,那么最有可能的就是试剂的问题了。APS的几率比较大,换换新的试剂试试。
另外,你脱色并不完全。你可以将胶放置于开水中,大约煮10分钟吧,直至颜色变淡即可,此方法可以省去你长时间的脱色!
4楼2009-09-22 22:50:06
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hong303030

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该是DNA降解的比较厉害,或者是引物的特异性不够好,应该不是跑胶的问题,凝胶我一般是半小时左右吧
2楼2009-09-22 22:37:03
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sonyk

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
测一下Tris缓冲液的PH值看准不准!

[ Last edited by sonyk on 2009-9-22 at 22:49 ]
3楼2009-09-22 22:48:32
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zijing5322

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的带应该在哪个位置啊?没有对照,中间有一段跑的挺好的啊。
我做蛋白质时上样之前都会轻度离心一下,那样跑出来的带没有拖尾现象,比较清楚。
另外,缓冲液的配制很关键。。
5楼2009-09-23 08:58:39
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