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[交流]
大肠杆菌表达蛋白心得体会
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各位大侠： 有做细菌表达的朋友吗？如果有，交流一下心得体会。先说明了，我是新小木虫，想求助点文献，可是啊，没有金币啊，也不知道发这个帖子能否为我换回点金币，也请大侠们指点一二啊，怎样获得金币！！！ 言归正传，前几次做大肠杆菌表达，一个偶然，发现这么一个现象：将表达菌涂布平板后，在冰箱（4℃）放置10天后，挑克隆，接种，然后诱导，同样表达出了目的蛋白，而且表达量感觉没有下降。 大家都知道，我们原来的概念是，转化-涂布平板-挑单克隆-接种-诱导表达是一条龙下来的，原来老师给我讲的是，只能从新涂布的平板上挑克隆，否则表达量很低，或者表达失败。 这个经验也请大家试试。它最大的好处是减少了工作量，做一次转化，可以做多次表达，节省时间。 [ Last edited by amisking on 2009-11-28 at 12:05 ] |
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对于新虫，可以去新手上路版块 http://muchong.com/bbs/forumdisplay.php?fid=215 那里有关于介绍如何赚取金币! |
3楼2009-09-22 18:00:17
HarveyWang
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我的平板在冰箱放置 25天还照样表达很高！ 关键是你的平板是验证过的。 所谓验证，就是每逢平板长好以后，随便挑10个做摇瓶，诱导表达， 都表达可以，这个平板才会在冰箱保藏， 并进一步用来做其他的实验。 此后再也不用担心种子问题了！ 这样优秀的平板也用来挑菌落保存菌株，甘油管-20℃， 一年内都不用再担心种子问题了！ 如果存在没有表达的菌落，你的平板就不能再用！！！ 就要继续筛菌，直到平板上的菌落随机调10个，都表达蛋白为止。  [ Last edited by HarveyWang on 2009-10-2 at 08:27 ] |
10楼2009-10-02 08:24:29
2楼2009-09-22 15:47:23
朋友介绍来到这里，觉得很有意思的。 4楼2009-09-23 09:08:21
5楼2009-09-24 11:17:01
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8楼2009-10-02 00:50:13
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9楼2009-10-02 08:18:19