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fallstone

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[交流] 大肠杆菌表达蛋白心得体会

各位大侠：
有做细菌表达的朋友吗？如果有，交流一下心得体会。先说明了，我是新小木虫，想求助点文献，可是啊，没有金币啊，也不知道发这个帖子能否为我换回点金币，也请大侠们指点一二啊，怎样获得金币！！！
言归正传，前几次做大肠杆菌表达，一个偶然，发现这么一个现象：将表达菌涂布平板后，在冰箱（4℃）放置10天后，挑克隆，接种，然后诱导，同样表达出了目的蛋白，而且表达量感觉没有下降。
大家都知道，我们原来的概念是，转化-涂布平板-挑单克隆-接种-诱导表达是一条龙下来的，原来老师给我讲的是，只能从新涂布的平板上挑克隆，否则表达量很低，或者表达失败。
这个经验也请大家试试。它最大的好处是减少了工作量，做一次转化，可以做多次表达，节省时间。

[ Last edited by amisking on 2009-11-28 at 12:05 ]

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1楼2009-09-22 15:46:11

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HarveyWang

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引用回帖:

Originally posted by fallstone at 2009-9-22 15:46:
各位大侠：
有做细菌表达的朋友吗？如果有，交流一下心得体会。先说明了，我是新小木虫，想求助点文献，可是啊，没有金币啊，也不知道发这个帖子能否为我换回点金币，也请大侠 ...

我的平板在冰箱放置 25天还照样表达很高！
关键是你的平板是验证过的。

所谓验证，就是每逢平板长好以后，随便挑10个做摇瓶，诱导表达，
都表达可以，这个平板才会在冰箱保藏，
并进一步用来做其他的实验。
此后再也不用担心种子问题了！

这样优秀的平板也用来挑菌落保存菌株，甘油管-20℃，
一年内都不用再担心种子问题了！

如果存在没有表达的菌落，你的平板就不能再用！！！
就要继续筛菌，直到平板上的菌落随机调10个，都表达蛋白为止。