24小时热门版块排行榜    

查看: 1185  |  回复: 13
当前主题已经存档。

stefa

新虫 (小有名气)

[交流] 融合蛋白目的蛋白不表达(急 在线等)

最近用PGEX-6p-1做表达载体 BL21作为宿主菌做原核表达
但是跑完SDS-PAGE后发现
导入重组质粒表达出来的蛋白和导入空质粒的菌表达出来的蛋白条带差不多
在26K这个位置都有明显的GST条带出现
请问这是怎么回事啊
重组质粒做过酶切验证 证实确实导入进了宿主菌
目的基因的三联体分析 也没有发现移码

[ Last edited by stefa on 2009-9-18 at 14:23 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

诱导表达了嘛?
2楼2009-09-18 14:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stefa

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-9-18 14:45:
诱导表达了嘛?

恩 表达的GST蛋白很明显
但连有目的蛋白的GST融合蛋白却看不到
3楼2009-09-18 14:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)


stefa(金币+1,VIP+0): 9-18 15:32
也就是说诱导后有表达,不过看起来表达的是空载体的GST标签,而不是融合蛋白,据你的表述表达并没有被错误终止,是不是重组质粒没有转入表达菌株呢,做个PCR检验一下,因为你测序肯定是用克隆菌株测得。
之前我也有过表达不出蛋白的经历,但是是融合蛋白完全不表达,你这既然表达GST说明是重组的问题的可能性大一些,再检验一下啊。
4楼2009-09-18 15:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stefa

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-9-18 15:11:
也就是说诱导后有表达,不过看起来表达的是空载体的GST标签,而不是融合蛋白,据你的表述表达并没有被错误终止,是不是重组质粒没有转入表达菌株呢,做个PCR检验一下,因为你测序肯定是用克隆菌株测得。
之前我也 ...

EN  我再做个PCR验证看看
如过证实重组质粒转入了表达菌株 那又该是什么问题呢
5楼2009-09-18 15:34:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

构建重组质粒的时候应该测过序了吧?有没有发生突变?
6楼2009-09-18 15:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stefa

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-9-18 15:35:
构建重组质粒的时候应该测过序了吧?有没有发生突变?

没有突变  在gene bank上对比过了很一致
7楼2009-09-18 15:44:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stefa

新虫 (小有名气)

我的目的基因片段有1.2Kb 不知道是不是太大 表达不了?
8楼2009-09-18 15:47:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stefa

新虫 (小有名气)

快来救命啊
9楼2009-09-18 18:54:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)

本来融合蛋白就不好表达,可能前面的蛋白有抑制。以前做过AB两基因串联表达,A表达,B不表达或量很少
10楼2009-09-18 19:03:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 stefa 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +23 医学老男孩 2026-08-13 49/2450 2026-08-14 20:02 by zhaifei
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +8 a089 2026-08-07 8/400 2026-08-14 18:46 by beefly
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见