应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 融合蛋白目的蛋白不表达（急 在线等）
51/1返回列表
查看: 1037  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

stefa

新虫 (小有名气)

[交流] 融合蛋白目的蛋白不表达（急 在线等）

最近用PGEX-6p-1做表达载体 BL21作为宿主菌做原核表达
但是跑完SDS-PAGE后发现
导入重组质粒表达出来的蛋白和导入空质粒的菌表达出来的蛋白条带差不多
在26K这个位置都有明显的GST条带出现
请问这是怎么回事啊
重组质粒做过酶切验证 证实确实导入进了宿主菌
目的基因的三联体分析 也没有发现移码

[ Last edited by stefa on 2009-9-18 at 14:23 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-18 14:19:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)
★
stefa(金币+1,VIP+0): 9-18 15:32
也就是说诱导后有表达，不过看起来表达的是空载体的GST标签，而不是融合蛋白，据你的表述表达并没有被错误终止，是不是重组质粒没有转入表达菌株呢，做个PCR检验一下，因为你测序肯定是用克隆菌株测得。
之前我也有过表达不出蛋白的经历，但是是融合蛋白完全不表达，你这既然表达GST说明是重组的问题的可能性大一些，再检验一下啊。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2009-09-18 15:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-9-18 14:45:
诱导表达了嘛？

恩 表达的GST蛋白很明显
但连有目的蛋白的GST融合蛋白却看不到
赞一下 回复此楼
3楼2009-09-18 14:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-9-18 15:11:
也就是说诱导后有表达，不过看起来表达的是空载体的GST标签，而不是融合蛋白，据你的表述表达并没有被错误终止，是不是重组质粒没有转入表达菌株呢，做个PCR检验一下，因为你测序肯定是用克隆菌株测得。
之前我也 ...

EN  我再做个PCR验证看看
如过证实重组质粒转入了表达菌株 那又该是什么问题呢
赞一下 回复此楼
5楼2009-09-18 15:34:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
构建重组质粒的时候应该测过序了吧？有没有发生突变？
赞一下 回复此楼
6楼2009-09-18 15:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +8 纸鱼ly 2026-03-21 9/450 2026-03-24 10:24 by 学术搬砖er
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭