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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 融合蛋白目的蛋白不表达（急 在线等）
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
stefa(金币+1,VIP+0): 9-19 16:46
这个载体表达GST融合蛋白是有问题的，你在网上搜一下，就会发现很多人也有这个问题，现在原因不明，可能原因是表达意外终止、表达后断裂等。
建议没有特别的目的，非要用这个载体，建议你选在his标签吧。大家都用这个，比较好纯化，而且his标签体积小，对一些实验也没有影响。
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11楼2009-09-18 21:19:27
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
stefa(金币+1,VIP+0): 9-19 16:46
你的蛋白不大，我的1.6kbp的用这个载体都能表达。楼主检查一下目的蛋白中是否含有太多或者串联出现的大肠杆菌稀有密码子
对于你的不表达原因我说不清楚，如果是我我会这么做：再挑几个克隆，再次进行诱导看是否有表达的；重新转化BL21(DE3)。

听说过共表达的情况，就是GST标签和融合蛋白都表达的。

[ Last edited by 月月大可 on 2009-9-19 at 08:39 ]
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12楼2009-09-19 08:38:26
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2009-9-19 08:38:
你的蛋白不大，我的1.6kbp的用这个载体都能表达。楼主检查一下目的蛋白中是否含有太多或者串联出现的大肠杆菌稀有密码子
对于你的不表达原因我说不清楚，如果是我我会这么做：再挑几个克隆，再次进行诱导看是否有 ...

恩  看了下有13个稀有密码子  没有串联出现的
目前正在尝试重新转化试试
但愿有效 Bless!
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13楼2009-09-19 16:53:54
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stefa

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2009-9-18 21:19:
这个载体表达GST融合蛋白是有问题的，你在网上搜一下，就会发现很多人也有这个问题，现在原因不明，可能原因是表达意外终止、表达后断裂等。
建议没有特别的目的，非要用这个载体，建议你选在his标签吧。大家都用 ...

实验室当时正好有这个载体 就用上了
现在换载体又一大堆的麻烦  
昨天做PCR验证的时候发现PCR扩增的片段不纯 有很多杂的小片段
现在打算重新转化下看有没有效果
哎  毕业愁啊！
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14楼2009-09-19 16:56:05
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