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04swlcm

金虫 (小有名气)

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专业: 生物化学

[交流] PCR产物直接酶切问题求助

最近做易错PCR方法的酶定向进化，转化老是不成功，现在找出原因是PCR产物直接酶切，没切出粘性末端，所以连不上，我一直用的是宝生物的酶，有时切4-6h，有时过夜都切不开。
希望请高手帮忙，提点意见和看法！谢谢了

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1楼2009-09-17 18:16:33

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jerryqpr

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公

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专业: 生物大分子结构与功能

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

我们实验室用fermentas的酶试过，pcr产物酶切是可以切出来的，不过还是推荐pcr-回收-酶切-回收-连接这个过程，虽然是麻烦了点。但是易错pcr就是追求小概率事件还是小心一点好，回收尽量用好的kit。
还有你的酶切位点是飘在引物上还是在你的pcr的条带上，最好还是放在引物上比较好，这样保证你可以切开，如果在易错pcr条带的范围内，很可能酶切位点就被直接突变了。
ps：你的金币够升级了

[ Last edited by jerryqpr on 2009-9-17 at 19:28 ]