应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR产物直接测序？
161/2返回列表12下一页
查看: 1374  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

fanxing001

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR产物直接测序？

各位，我想筛选人肠道中的菌，我想用体外培养的方式将各种细菌的单菌落分开，然后选择通用引物，进行16s rDNA的PCR，以便确定各细菌归属，我的问题是：PCR后能否不经过转到基因工程菌的方式，直接将PCR产物测序？如果可行的话，对论文的档次是否存在影响？谢谢

[ Last edited by amisking on 2009-9-17 at 12:55 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-17 10:49:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 9-17 11:24
PCR产物很少直接测序，因为会存在错配，测序时会有多峰的，不准确。我不知道你为什么要直接测序，转到基因工程菌里会有影响吗？如果没有可以考虑测单克隆，比较准确。不过测序公司是提供直接测序的。我不是很了解对文章的影响，你查查看吧
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2009-09-17 11:12:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaoyl0679

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
16S 较长，可以直接测序，一把可以测出1400bp左右，够比对确定到属
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-09-17 11:20:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以连接T载体直接测序。单向测序有效结果900bp左右 可以双向测。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-09-17 12:11:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孔乙己

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
真菌鉴定很多都不做T载体连接，直接测序，影响不大，对比对出入也不大，我亲自试过的，英竣测序就比较好，生工一般
赞一下(1人) 回复此楼
愿大家共同进步
5楼2009-09-17 12:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangym1123

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以直接测序啊！华大基因也不错呢！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-09-17 12:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuezhen

银虫 (小有名气)
学习中！
回复此楼
7楼2009-09-17 13:03:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得PCR产物直接测序的话是不好或者不行的，因为在PCR产物中，正确是序列只占一部分，仍然存在很多碱基错配的序列，虽然在整体上占的比例并不是很多，毕竟测序的话还是需要一定纯度及浓度的。我觉得可以做个TA克隆后再测序。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-09-17 13:46:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)
学习了顶一下
回复此楼
9楼2009-09-17 14:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接测序是完全可以的，不过要看你是做什么了。。。比如你这个，我认为直接测不妥，因为你要的有效序列能越长则越好，因为你肯定要做序列比对，做分析或者进化树的，所以需要你扩出来的片段的全序列。。所以只能连到载体上测，做平连或TA克隆都可以。。。。PCR测序中，靠近引物的几十个bp是测不出来的，所以PCR测时测不出全序列的。。。这当然会影响到你的实验说服力了。。
      如果你只需要片段中部的一段序列，那用PCR产物直接测是可以的。不过要注意PCR产物切胶和回收要做干净。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-09-17 20:27:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fanxing001 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +4 研研，接电话 2026-03-24 4/200 2026-03-24 07:30 by wangy0907
[考研] 07化学280分求调剂 +4 722865 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:01 by chixmc
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +4 谷雨上岸 2026-03-23 5/250 2026-03-23 21:18 by 不惑可乐
[考研] 材料专硕英一数二306 +8 z1z2z3879 2026-03-18 8/400 2026-03-23 20:49 by baobaoye
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +4 石能伟 2026-03-17 4/200 2026-03-23 17:51 by 17862566385
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭