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fanxing001

铜虫 (小有名气)

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[交流] PCR产物直接测序？

各位，我想筛选人肠道中的菌，我想用体外培养的方式将各种细菌的单菌落分开，然后选择通用引物，进行16s rDNA的PCR，以便确定各细菌归属，我的问题是：PCR后能否不经过转到基因工程菌的方式，直接将PCR产物测序？如果可行的话，对论文的档次是否存在影响？谢谢

[ Last edited by amisking on 2009-9-17 at 12:55 ]

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1楼2009-09-17 10:49:46

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spiderboy

金虫 (正式写手)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

直接测序是完全可以的，不过要看你是做什么了。。。比如你这个，我认为直接测不妥，因为你要的有效序列能越长则越好，因为你肯定要做序列比对，做分析或者进化树的，所以需要你扩出来的片段的全序列。。所以只能连到载体上测，做平连或TA克隆都可以。。。。PCR测序中，靠近引物的几十个bp是测不出来的，所以PCR测时测不出全序列的。。。这当然会影响到你的实验说服力了。。
如果你只需要片段中部的一段序列，那用PCR产物直接测是可以的。不过要注意PCR产物切胶和回收要做干净。