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fanxing001

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR产物直接测序?

各位,我想筛选人肠道中的菌,我想用体外培养的方式将各种细菌的单菌落分开,然后选择通用引物,进行16s rDNA的PCR,以便确定各细菌归属,我的问题是:PCR后能否不经过转到基因工程菌的方式,直接将PCR产物测序?如果可行的话,对论文的档次是否存在影响?谢谢

[ Last edited by amisking on 2009-9-17 at 12:55 ]
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yaoyl0679

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
16S 较长,可以直接测序,一把可以测出1400bp左右,够比对确定到属
3楼2009-09-17 11:20:17
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bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 9-17 11:24
PCR产物很少直接测序,因为会存在错配,测序时会有多峰的,不准确。我不知道你为什么要直接测序,转到基因工程菌里会有影响吗?如果没有可以考虑测单克隆,比较准确。不过测序公司是提供直接测序的。我不是很了解对文章的影响,你查查看吧
2楼2009-09-17 11:12:48
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以连接T载体直接测序。单向测序有效结果900bp左右 可以双向测。
4楼2009-09-17 12:11:57
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孔乙己

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
真菌鉴定很多都不做T载体连接,直接测序,影响不大,对比对出入也不大,我亲自试过的,英竣测序就比较好,生工一般
愿大家共同进步
5楼2009-09-17 12:16:06
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