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简写的青春

[交流] [求助] 请教各位大哥大姐:怎样防止RNA在纯化过程中降解?

请教各位大哥大姐:
      小弟提取RNA用的是CTAB 法,用等体积24:1抽提3次,然后用2/3体积异丙醇沉淀30分钟,70%酒精洗两次,晾干,溶于DEPC处理过的水中。
      然后加入DNA酶处理,再用24:1抽提2次,2/3体积异丙醇沉淀30分钟,70%酒精洗两次,晾干,溶于DEPC处理过的水中。
     初提的RNA质量还好,至少有1.5:1,但是经过纯化后质量就下降了,有时候是部分降解,有时候是完全降解,操作上应该没有问题了,但不知道为什么总是降解。
     请各位高人指点迷津。谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 09:52 ]
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svidy

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你所用的试剂、用具有没严格祛除RNA酶,包括整个实验环境,要求很高的。RNA降解酶到处都是
2楼2009-09-15 12:21:26
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xuezhen

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
过程保持低温,试剂用DEPC处理水配制,戴口罩,勤换手套之类,看实验室他们是这样做的,过程速度要快点!
3楼2009-09-15 12:56:13
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yxhan7113

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
实验用具包括tips,tubes等都要用RNA酶free的
所有试剂用到水的用DEPC处理,没有水的RNA提取专用
操作小心迅速
4楼2009-09-15 13:26:53
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
尽量减少实验中的操作步骤,异丙醇沉淀10min即可。70%酒精洗涤一次即可
5楼2009-09-15 13:56:05
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695

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by yxhan7113 at 2009-9-15 13:26:
实验用具包括tips,tubes等都要用RNA酶free的
所有试剂用到水的用DEPC处理,没有水的RNA提取专用
操作小心迅速

总结的好,学习了
6楼2009-09-15 15:10:28
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简写的青春

谢谢各位了,我是在考虑有没有更好的纯化的方法,我请实验室的博士帮忙提了几次,效果也不好,28S:18S都是0.9、0.8 ,部分降解,很郁闷的。
7楼2009-09-15 19:47:26
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