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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助] 请教各位大哥大姐：怎样防止RNA在纯化过程中降解？
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简写的青春

[交流] [求助] 请教各位大哥大姐：怎样防止RNA在纯化过程中降解？

请教各位大哥大姐：
      小弟提取RNA用的是CTAB 法，用等体积24：1抽提3次，然后用2/3体积异丙醇沉淀30分钟，70%酒精洗两次，晾干，溶于DEPC处理过的水中。
      然后加入DNA酶处理，再用24：1抽提2次，2/3体积异丙醇沉淀30分钟，70%酒精洗两次，晾干，溶于DEPC处理过的水中。
     初提的RNA质量还好，至少有1.5：1，但是经过纯化后质量就下降了，有时候是部分降解，有时候是完全降解，操作上应该没有问题了，但不知道为什么总是降解。
     请各位高人指点迷津。谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 09:52 ]
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1楼 2009-09-15 12:05:01
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svidy

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你所用的试剂、用具有没严格祛除RNA酶，包括整个实验环境，要求很高的。RNA降解酶到处都是
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2楼2009-09-15 12:21:26
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xuezhen

银虫 (小有名气)
★
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过程保持低温，试剂用DEPC处理水配制，戴口罩，勤换手套之类，看实验室他们是这样做的，过程速度要快点！
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3楼2009-09-15 12:56:13
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yxhan7113

金虫 (小有名气)
★
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实验用具包括tips，tubes等都要用RNA酶free的
所有试剂用到水的用DEPC处理，没有水的RNA提取专用
操作小心迅速
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4楼2009-09-15 13:26:53
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)
★
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尽量减少实验中的操作步骤，异丙醇沉淀10min即可。70%酒精洗涤一次即可
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5楼2009-09-15 13:56:05
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695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by yxhan7113 at 2009-9-15 13:26:
实验用具包括tips，tubes等都要用RNA酶free的
所有试剂用到水的用DEPC处理，没有水的RNA提取专用
操作小心迅速

总结的好，学习了
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6楼2009-09-15 15:10:28
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简写的青春

谢谢各位了，我是在考虑有没有更好的纯化的方法，我请实验室的博士帮忙提了几次，效果也不好，28S：18S都是0.9、0.8 ，部分降解，很郁闷的。
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7楼2009-09-15 19:47:26
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