应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
71/1返回列表
查看: 1707  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

YL0501

新虫 (初入文坛)

[交流] 载体构建 已有6人参与

做原核表达，在构建载体时，目的条带750bp，用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右，引物两端加上酶切位点后扩增出来的大小就只有500左右大小了，用的模板是去除基因组DNA的cDNA，这是因为什么？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-10-13 18:47:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
分子生物学太玄了 顶

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
我思故我在
2楼2022-10-13 20:50:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dehong1573

至尊木虫 (正式写手)
建议酶切验证~
回复此楼
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
3楼2022-10-14 14:01:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

AD_com

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
测个序看看是不是你的条带就行了 不用纠结
赞一下 回复此楼
4楼2022-10-14 20:30:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longanzz

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右，可以把产物直接回收、连接到T载体上，进行挑菌测序，如果正确的话，可以用T载体上的链接的片段（菌液或者质粒）作为模板，在用你加上酶切位点的引物进行扩增。你加上酶切位点的引物进行直接扩增，得到的不一定是你想要的片段。如果你想确定大小是否正确，也需要测序。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2022-10-15 15:58:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinkairui123

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这种问题就不值得深入追查了。 几百bp的基因, 可以交由公司直接构建完成。 可以把宝贵的时间用在思路创新上。
赞一下 回复此楼
武汉金开瑞生物，提供核酸和蛋白的整体研究方案
6楼2022-10-20 09:24:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

影小喵

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by longanzz at 2022-10-15 15:58:54
如果用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右，可以把产物直接回收、连接到T载体上，进行挑菌测序，如果正确的话，可以用T载体上的链接的片段（菌液或者质粒）作为模板，在用你加上酶切位点的引物进行扩增。你加上酶 ...

我用的就是这种方法，但是为什么测序出来还是没加酶切位点的片段啊？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2023-03-30 13:54:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 YL0501 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 20/1000 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 05:54 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 05:44 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-06 05:22 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:15 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-06 04:49 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭