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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
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YL0501

新虫 (初入文坛)

[交流] 载体构建 已有6人参与

做原核表达，在构建载体时，目的条带750bp，用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右，引物两端加上酶切位点后扩增出来的大小就只有500左右大小了，用的模板是去除基因组DNA的cDNA，这是因为什么？

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1楼 2022-10-13 18:47:36
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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
分子生物学太玄了 顶

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我思故我在
2楼2022-10-13 20:50:59
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)
建议酶切验证~
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
3楼2022-10-14 14:01:13
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AD_com

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
测个序看看是不是你的条带就行了 不用纠结
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4楼2022-10-14 20:30:44
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longanzz

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右，可以把产物直接回收、连接到T载体上，进行挑菌测序，如果正确的话，可以用T载体上的链接的片段（菌液或者质粒）作为模板，在用你加上酶切位点的引物进行扩增。你加上酶切位点的引物进行直接扩增，得到的不一定是你想要的片段。如果你想确定大小是否正确，也需要测序。
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5楼2022-10-15 15:58:54
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jinkairui123

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这种问题就不值得深入追查了。 几百bp的基因, 可以交由公司直接构建完成。 可以把宝贵的时间用在思路创新上。
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武汉金开瑞生物，提供核酸和蛋白的整体研究方案
6楼2022-10-20 09:24:19
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影小喵

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by longanzz at 2022-10-15 15:58:54
如果用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右，可以把产物直接回收、连接到T载体上，进行挑菌测序，如果正确的话，可以用T载体上的链接的片段（菌液或者质粒）作为模板，在用你加上酶切位点的引物进行扩增。你加上酶 ...

我用的就是这种方法，但是为什么测序出来还是没加酶切位点的片段啊？

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7楼2023-03-30 13:54:20
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