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新虫 (初入文坛)

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专业: 水产生物遗传育种学

[交流] 载体构建已有6人参与

做原核表达，在构建载体时，目的条带750bp，用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右，引物两端加上酶切位点后扩增出来的大小就只有500左右大小了，用的模板是去除基因组DNA的cDNA，这是因为什么？

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1楼 2022-10-13 18:47:36

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

影小喵

新虫 (初入文坛)

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注册: 2017-10-20
专业: 中药学

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引用回帖:

5楼: Originally posted by longanzz at 2022-10-15 15:58:54
如果用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右，可以把产物直接回收、连接到T载体上，进行挑菌测序，如果正确的话，可以用T载体上的链接的片段（菌液或者质粒）作为模板，在用你加上酶切位点的引物进行扩增。你加上酶 ...

我用的就是这种方法，但是为什么测序出来还是没加酶切位点的片段啊？

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