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YL0501

新虫 (初入文坛)

[交流] 载体构建已有6人参与

做原核表达,在构建载体时,目的条带750bp,用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右,引物两端加上酶切位点后扩增出来的大小就只有500左右大小了,用的模板是去除基因组DNA的cDNA,这是因为什么?

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影小喵

新虫 (初入文坛)


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引用回帖:
5楼: Originally posted by longanzz at 2022-10-15 15:58:54
如果用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右,可以把产物直接回收、连接到T载体上,进行挑菌测序,如果正确的话,可以用T载体上的链接的片段(菌液或者质粒)作为模板,在用你加上酶切位点的引物进行扩增。你加上酶 ...

我用的就是这种方法,但是为什么测序出来还是没加酶切位点的片段啊?

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7楼2023-03-30 13:54:20
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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分子生物学太玄了 顶

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我思故我在
2楼2022-10-13 20:50:59
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金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
测个序看看是不是你的条带就行了 不用纠结
4楼2022-10-14 20:30:44
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longanzz

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果用克隆的引物扩增出来的条带是750bp左右,可以把产物直接回收、连接到T载体上,进行挑菌测序,如果正确的话,可以用T载体上的链接的片段(菌液或者质粒)作为模板,在用你加上酶切位点的引物进行扩增。你加上酶切位点的引物进行直接扩增,得到的不一定是你想要的片段。如果你想确定大小是否正确,也需要测序。
5楼2022-10-15 15:58:54
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