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过而知之者

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助】葡聚糖G-15测定寡肽分子量

葡聚糖凝胶G-15，玻璃层析柱：70cm×1.6cm，流动相超纯水，流速：0.5mL/min，检测波长280nm。
标准品：牛血清白蛋白组分五 MW68000，VB12 MW1335，氧化型谷胱甘肽 MW635，L-酪氨酸 MW181.
------------------------------------------------
问题：1.牛血清蛋白组分五一直没有出现过洗脱峰，但在普通分光光度计280nm有吸收。这是为什么？
2.VB12、氧化型谷胱甘肽、L-酪氨酸三者的洗脱体积依次为135mL、97mL、142mL，也就是说分子量最大的VB12的洗脱体积比氧化型谷胱甘肽的洗脱体积还要大，理论上说是不可能的，重复试验依然是同样的结果。这是为什么？

对于第一个问题我想是因牛血清组分五的分子量远大于G-15分离上限而导致根本不能通过层析柱造成，这样解释不知道对不对？第二个问题至今没解决，对以上两个问题希望高手虫友帮忙分析一下！！在此先谢过了！

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1楼2009-09-14 11:02:03

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过而知之者

银虫 (小有名气)

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★
lwb1987521(金币+1,VIP+0):鼓励新虫发帖阐述自己的问题和观点 11-4 11:32

反馈结果，用杆菌肽(Mw=1442)、氧化型谷胱甘肽(Mw=612)、还原型谷胱甘肽(Mw =307)做标准品做标曲，结果也很不理想，现在我在想应该是凝胶的问题，凝胶不好才导致这样的问题。奸商用国产次品充当进口法玛西亚的凝胶？
后来我就用HPLC的反相Ｃ１８柱做，收集单峰进行质谱分析，但发现两种质谱仪测定的分子量竟有很大的差异，请各位看看下面链接里具体的说明，并请帮忙分析一下。因为我想大家如果做这方面相关内容的话，应该对我下面这些比较感兴趣或者已有相关研究，请不吝赐教！
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1639750&pid=16416803&page=1