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【求助】葡聚糖G-15测定寡肽分子量
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葡聚糖凝胶G-15，玻璃层析柱：70cm×1.6cm，流动相超纯水，流速：0.5mL/min，检测波长280nm。 标准品：牛血清白蛋白组分五 MW68000，VB12 MW1335，氧化型谷胱甘肽 MW635，L-酪氨酸 MW181. ------------------------------------------------ 问题：1.牛血清蛋白组分五一直没有出现过洗脱峰，但在普通分光光度计280nm有吸收。这是为什么？ 2.VB12、氧化型谷胱甘肽、L-酪氨酸三者的洗脱体积依次为135mL、97mL、142mL，也就是说分子量最大的VB12的洗脱体积比氧化型谷胱甘肽的洗脱体积还要大，理论上说是不可能的，重复试验依然是同样的结果。这是为什么？ 对于第一个问题我想是因牛血清组分五的分子量远大于G-15分离上限而导致根本不能通过层析柱造成，这样解释不知道对不对？第二个问题至今没解决，对以上两个问题希望高手虫友帮忙分析一下！！在此先谢过了！ |
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chn12503171
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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关于凝胶过滤色谱，你的大分子不出峰的解释，肯定是不对 sephadex G-15,理论上讲，分子量越大，出峰时间约早，你的68000的峰应该在一个洗脱体积1/3处，即50ml左右出出峰，不出峰的原因， （1）首先看看你的柱子装得是否合适，比如是否有气泡，是否有断层，这些都会影响正常的出峰时间和出峰的峰行及分辨率 （2）你的上样量是否足够，一般情况下，sephadex G-15的本身分辨率就不是很高，很难有尖锐的峰，也就是意味着，浓度大量被分散，如果你的上样量很低，那么被分散后，就可能测定不到。正常情况，请十倍稀释后看看紫外是否有吸收，如果没有吸收，那说明你的上样量太低了 （3）VB12本来就不应该作为这个系列的标准品 |
5楼2009-09-20 13:06:57