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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 其他 » 【求助】葡聚糖G-15测定寡肽分子量
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过而知之者

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】葡聚糖G-15测定寡肽分子量

葡聚糖凝胶G-15，玻璃层析柱：70cm×1.6cm，流动相超纯水，流速：0.5mL/min，检测波长280nm。
标准品：牛血清白蛋白组分五 MW68000，VB12  MW1335，氧化型谷胱甘肽  MW635，L-酪氨酸  MW181.
------------------------------------------------
问题：1.牛血清蛋白组分五一直没有出现过洗脱峰，但在普通分光光度计280nm有吸收。这是为什么？
           2.VB12、氧化型谷胱甘肽、L-酪氨酸三者的洗脱体积依次为135mL、97mL、142mL，也就是说分子量最大的VB12的洗脱体积比氧化型谷胱甘肽的洗脱体积还要大，理论上说是不可能的，重复试验依然是同样的结果。这是为什么？

对于第一个问题我想是因牛血清组分五的分子量远大于G-15分离上限而导致根本不能通过层析柱造成，这样解释不知道对不对？第二个问题至今没解决，对以上两个问题希望高手虫友帮忙分析一下！！在此先谢过了！
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1楼 2009-09-14 11:02:03
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过而知之者

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by syuchenj at 2009-9-20 13:06:
关于凝胶过滤色谱，你的大分子不出峰的解释，肯定是不对
sephadex G-15,理论上讲，分子量越大，出峰时间约早，你的68000的峰应该在一个洗脱体积1/3处，即50ml左右出出峰，不出峰的原因，
（1）首先看看你的柱子 ...

谢谢你详细的分析！
外观上看我的柱子装是没有问题的，从现有的标准品的色谱图看，峰形很完美，所以我想装柱是没问题的吧？
这里标准品的浓度的差异会不会造成结果较大的差异呢？每次上样都是1ml的。除了BSA无峰，其他均有不同信号强度的峰形出来。
vb12有人拿来做标准品，我觉得也不可行，要是标准品都是蛋白类的才有参考意义吧。
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7楼2009-09-24 15:51:26
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过而知之者

银虫 (小有名气)
都没人顶一下，自己顶。有做过的说说呀
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2楼2009-09-14 15:12:33
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chn12503171

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
标准品全部用多肽试试啊
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3楼2009-09-19 16:19:11
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peakfly

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lwb1987521(金币+1,VIP+0):感谢您的回帖，欢迎常来食品版 11-7 15:30
取杆菌肽(Mw=1442)、氧化型谷胱甘肽(Mw=612)、还原型谷胱甘肽(Mw =307)、牛血清白蛋白（Mw=68000）
赞一下(7人) 回复此楼
认真做事能够把事做对，用心做事才能把事情做好！
4楼2009-09-19 17:28:46
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