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大肠杆菌原核表达，菌液直接SDS-PAGE跑不出来条带，求助已有2人参与
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最近在做原核表达，大肠杆菌诱导后做SDS-PAGE，其中菌液直接跑胶上个月还能做出来，突然有一天跑不出来了，怀疑是自己操作问题。 但是超声后的上清依然有目的蛋白表达，请问各位是什么原因？ 我的样品处理是这样的： 1 取诱导后菌液，8000g5min离心，弃上清，PBS重悬再8000g5min离心，弃上清； 2 沉淀用25%原体积的裂解buffer重悬后，+蛋白上样buffer，95℃煮沸5min，12000g离心2min，取上清上样 |
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2楼2022-08-17 20:05:06
3楼2022-08-17 20:06:40
高飞雄
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fuyuandj86: 金币+10, 鼓励交流 2022-09-10 13:35:29
fuyuandj86: 金币+10, 鼓励交流 2022-09-10 13:35:29
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我的方法可能有点问题，我跟你说一下吧，作为参考。 将培养后离心收集的沉淀用1/5体积的裂解液(LE buffer)重悬，和正常蛋白样品处理方法一样，菌液100ul+25ul蛋白上样buffer，95℃煮10分钟，12000离心1min，取上清上样。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2022-08-29 17:06:38
10楼2022-09-02 13:12:31