| 查看: 2303 | 回复: 13 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者SuYuo将赠送您 10 个金币 | ||
[求助]
大肠杆菌原核表达，菌液直接SDS-PAGE跑不出来条带，求助 已有2人参与
|
||
|
最近在做原核表达，大肠杆菌诱导后做SDS-PAGE，其中菌液直接跑胶上个月还能做出来，突然有一天跑不出来了，怀疑是自己操作问题。 但是超声后的上清依然有目的蛋白表达，请问各位是什么原因？ 我的样品处理是这样的： 1 取诱导后菌液，8000g5min离心，弃上清，PBS重悬再8000g5min离心，弃上清； 2 沉淀用25%原体积的裂解buffer重悬后，+蛋白上样buffer，95℃煮沸5min，12000g离心2min，取上清上样 |
回复此楼» 猜你喜欢
有时候真觉得大城市人没有县城人甚至个体户幸福
已经有11人回复
-
表哥与省会女结婚，父母去帮带孩子被省会女气回家生重病了
已经有7人回复
-
同年申请2项不同项目，第1个项目里不写第2个项目的信息，可以吗
已经有8人回复
-
依托企业入选了国家启明计划青年人才。有无高校可以引进的。
已经有7人回复
-
依托企业入选了国家启明计划青年人才。有无高校可以引进的。
已经有10人回复
-
天津大学招2026.09的博士生，欢迎大家推荐交流（博导是本人）
已经有9人回复
-
有院领导为了换新车，用横向课题经费买了俩车
已经有10人回复
-
AI 太可怕了，写基金时，提出想法，直接生成的文字比自己想得深远，还有科学性
已经有6人回复
-
酰胺脱乙酰基
已经有13人回复
2楼2022-08-17 20:05:06
3楼2022-08-17 20:06:40
高飞雄
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1876.3
- 散金: 106
- 红花: 3
- 沙发: 4
- 帖子: 749
- 在线: 42.2小时
- 虫号: 7840278
- 注册: 2018-01-28
- 专业: 生物化学
4楼2022-08-18 14:23:26
5楼2022-08-19 16:04:03
6楼2022-08-19 22:41:02
7楼2022-08-20 22:20:13
8楼2022-08-25 16:03:38
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
fuyuandj86: 金币+10, 鼓励交流 2022-09-10 13:35:29
fuyuandj86: 金币+10, 鼓励交流 2022-09-10 13:35:29
|
我的方法可能有点问题，我跟你说一下吧，作为参考。 将培养后离心收集的沉淀用1/5体积的裂解液(LE buffer)重悬，和正常蛋白样品处理方法一样，菌液100ul+25ul蛋白上样buffer，95℃煮10分钟，12000离心1min，取上清上样。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2022-08-29 17:06:38
10楼2022-09-02 13:12:31