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陈伟don

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

确定表达没问题的话,建议第一次收获细菌沉淀后,直接加loading dye 然后boiling,直接loading 到SDS PAGE
11楼2022-09-02 15:43:54
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SuYuo

铁虫 (小有名气)

知道问题了,蛋白表达量太低的原因,再次回复一下帮助避雷。
超声上清的很重的的条带是14kDa的溶菌酶, 因为刚好跟我的目的条带大小相近,导致我误认为是目的条带。
做了几个月也累积了一些经验,遇到困难的朋友可相互交流下。
12
12楼2022-09-07 10:39:45
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小鸟游佑太

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得有没有可能是DTT失效了,蛋白变为多聚体,你要不试试样品中补加一些DTT或者β-巯基乙醇
13楼2022-09-07 11:11:20
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SuYuo

铁虫 (小有名气)

找到原因了,是溶菌酶影响了条带显示,溶菌酶的分子量为14kDa,之前我的蛋白表达量很低,所以其实没有跑出条带,溶菌酶给了假象,大家一定注意!!!
12
14楼2022-11-20 22:04:55
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