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铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

确定表达没问题的话，建议第一次收获细菌沉淀后，直接加loading dye 然后boiling，直接loading 到SDS PAGE

11楼2022-09-02 15:43:54

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铁虫 (小有名气)

知道问题了，蛋白表达量太低的原因，再次回复一下帮助避雷。
超声上清的很重的的条带是14kDa的溶菌酶，因为刚好跟我的目的条带大小相近，导致我误认为是目的条带。
做了几个月也累积了一些经验，遇到困难的朋友可相互交流下。

12楼2022-09-07 10:39:45

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新虫 (初入文坛)

我觉得有没有可能是DTT失效了，蛋白变为多聚体，你要不试试样品中补加一些DTT或者β-巯基乙醇

13楼2022-09-07 11:11:20

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铁虫 (小有名气)

找到原因了，是溶菌酶影响了条带显示，溶菌酶的分子量为14kDa，之前我的蛋白表达量很低，所以其实没有跑出条带，溶菌酶给了假象，大家一定注意！！！

14楼2022-11-20 22:04:55

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