| 查看: 2309 | 回复: 13 | |||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者SuYuo将赠送您 10 个金币 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
大肠杆菌原核表达，菌液直接SDS-PAGE跑不出来条带，求助 已有2人参与
|
|||
|
最近在做原核表达，大肠杆菌诱导后做SDS-PAGE，其中菌液直接跑胶上个月还能做出来，突然有一天跑不出来了，怀疑是自己操作问题。 但是超声后的上清依然有目的蛋白表达，请问各位是什么原因？ 我的样品处理是这样的： 1 取诱导后菌液，8000g5min离心，弃上清，PBS重悬再8000g5min离心，弃上清； 2 沉淀用25%原体积的裂解buffer重悬后，+蛋白上样buffer，95℃煮沸5min，12000g离心2min，取上清上样 |
回复此楼» 猜你喜欢
今年春晚有几个节目很不错，点赞！
已经有4人回复
-
球磨粉体时遇到了大的问题，请指教！
已经有15人回复
-
过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链
已经有5人回复
-
情人节自我反思：在爱情中有过遗憾吗？
已经有5人回复
-
江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后
已经有3人回复
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
fuyuandj86: 金币+10, 鼓励交流 2022-09-10 13:35:29
fuyuandj86: 金币+10, 鼓励交流 2022-09-10 13:35:29
|
我的方法可能有点问题，我跟你说一下吧，作为参考。 将培养后离心收集的沉淀用1/5体积的裂解液(LE buffer)重悬，和正常蛋白样品处理方法一样，菌液100ul+25ul蛋白上样buffer，95℃煮10分钟，12000离心1min，取上清上样。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2022-08-29 17:06:38
2楼2022-08-17 20:05:06
3楼2022-08-17 20:06:40
高飞雄
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1876.3
- 散金: 106
- 红花: 3
- 沙发: 4
- 帖子: 749
- 在线: 42.2小时
- 虫号: 7840278
- 注册: 2018-01-28
- 专业: 生物化学
4楼2022-08-18 14:23:26