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draxlx新虫 (小有名气)
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[求助]
构建且成功表达过的重组质粒 复测数据时不表达了 已有1人参与
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各位大佬，诚心求助。 4月份的时候，我用无缝克隆技术构建了一个 "目的基因+耐热基因+表达载体" 的重组质粒 ，成功表达了“目的基因+耐热基因”的融合蛋白，测其酶学特性显示 ：融合蛋白比野生酶在温度稳定性方面有了极大改善。 现在7月份，我用当初保藏的菌种 再次扩培、破胞、纯化，复测其温度稳定性，发现与野生酶一样，重复不出当初的数据。 跑过菌液电泳，确实是重组质粒的菌液没有拿错。 又跑了蛋白胶，结果没有融合蛋白的表达条带，反而有野生酶的表达条带。（怪不得复测的时候，融合蛋白与野生酶的数据几乎一模一样，差别十分微小） 有没有朋友出现过这种情况啊？ （4月份所测的数据是没有错的，因为当时短时间内有3个人都测了，三个人测出来的数据是高度统一的。） |
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