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brightjoe

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 对PCR产物加A尾

我用的是高保真酶,PCR产物为平滑末端,如何用Taq酶对PCR产物加A尾?望说得详细一点。谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 09:54 ]
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gastrodia

金虫 (正式写手)


brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:28
无需加尾,直接连平端载体transgen的pEASY-blunt,双抗(amp+kan),topo克隆5min搞定
7楼2009-09-11 00:24:39
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merkel

铁虫 (初入文坛)


brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:27
看pGEM-T 载体的说明书,上面有,说明书网上有的下
2楼2009-09-10 20:09:15
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zhaolixia0814

金虫 (小有名气)

★ ★
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:27
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-23 18:02
用过天根的加A反应液,就是利用DNA聚合酶与dATP反应来加A,按说明书操作即可,效果还可以
3楼2009-09-10 20:24:54
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
brightjoe(金币+2,VIP+0): 9-11 12:27
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-14 14:53
法一:所有循环结束后,暂停反应,在反应体系中加少量taq酶,72℃40min即可。
法二:pfu和taq混合跑pcr,即可加尾
4楼2009-09-10 20:29:44
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